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冰雪灵魂

木虫 (著名写手)

食品科学家族族长

[求助] 荧光定量PCR如何进行绝对定量? 已有2人参与

real-time PCR 分绝对定量和相对定量,我做的是绝对定量。绝对定量需要绘制标准曲线  标曲的恒坐标是基因拷贝数的对数值 纵坐标是CT值。
问题一:跑样品得到CT值后  如何从基因浓度换算回活菌数。(我做的是要这种PCR测定干酪样品中双歧杆菌的活菌数)
问题二:用标准品做标准曲线。我的标准品就是纯培养的双歧杆菌吗?从菌体中提取DNA ?
问题三:在四楼人做的都是提rna,我看文献中写的都是提DNA,还有文献提的是将目的基因转到大肠菌的质粒中   然后再提质粒,有什么区别?
问题四:需要特异性引物或者探针,如何设计?
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要想得到常人所不能得到的,就懂得付出常人所不能付出的!
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