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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，分子生物学有些问题求解
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hahayou36532

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助，分子生物学有些问题求解 已有1人参与

1、PCR-RFLP 引物特殊要求：PCR产物的长度为什么是200-1000bp?           酶切后产物片断的大小差距为什么是100bp以上？
2、琼脂糖凝胶电泳分离0.2-10kb的DNA。还是0.2-20kb的DNA？            聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分离小于500nt（Nucleotide）的RNA。它的大小和KB有什么区别呢？
在线等大神解答。。。我学食品的对这个真不了解。。。
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开心就好
1楼 2013-12-07 18:48:22
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王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:56
1.确定你要获得的酯酶的基因序列，然后设计引物，PCR对目的基因进行扩增。
2.一般载体可以选择质粒，用酶切将目的基因和质粒进行连接。
3.感受态细胞可以选择大肠杆菌，将连接好的质粒转化到细胞中，摇菌，让细菌生长。一般再送到公司进行测序。
4.铺板子，也就是LB板，可以选择性的使带有目的基因的细菌存活继续生长。
大致步骤就是 PCR--连接--转化
  恩 差不多就这样了。
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5楼2013-12-11 16:49:03
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gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 21:22:24
hahayou36532: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢高材生， 2013-12-10 22:04:52
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp
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2楼2013-12-07 20:17:48
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hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-12-07 20:17:48
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp

大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否说下四步你的具体如何展开，试剂的用量这些细枝末节没必要说明，主要求一下思路。。。
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开心就好
3楼2013-12-10 22:28:56
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王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by hahayou36532 at 2013-12-10 22:28:56
大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否 ...

1.确定你的那个酯酶的基因序列，设计引物，PCR扩增目的基因
2.选择载体，可用质粒，利用酶切将目的基因与载体连接。一般连接后要送到公司测序
3.将连接好的质粒转入感受态细胞，一般是大肠杆菌细胞。然后摇菌，扩增。
4.铺板子，即LB板，里面会有抗生素，所以将均菌液涂板子后，带有目的基因的的细菌会继续增长。生长一般过夜
  差不多就这样吧
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4楼2013-12-11 16:41:05
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