应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，分子生物学有些问题求解
61/1返回列表
查看: 894  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hahayou36532

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助，分子生物学有些问题求解 已有1人参与

1、PCR-RFLP 引物特殊要求：PCR产物的长度为什么是200-1000bp?           酶切后产物片断的大小差距为什么是100bp以上？
2、琼脂糖凝胶电泳分离0.2-10kb的DNA。还是0.2-20kb的DNA？            聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分离小于500nt（Nucleotide）的RNA。它的大小和KB有什么区别呢？
在线等大神解答。。。我学食品的对这个真不了解。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
开心就好
1楼 2013-12-07 18:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 21:22:24
hahayou36532: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢高材生， 2013-12-10 22:04:52
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-07 20:17:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-12-07 20:17:48
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp

大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否说下四步你的具体如何展开，试剂的用量这些细枝末节没必要说明，主要求一下思路。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
3楼2013-12-10 22:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by hahayou36532 at 2013-12-10 22:28:56
大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否 ...

1.确定你的那个酯酶的基因序列，设计引物，PCR扩增目的基因
2.选择载体，可用质粒，利用酶切将目的基因与载体连接。一般连接后要送到公司测序
3.将连接好的质粒转入感受态细胞，一般是大肠杆菌细胞。然后摇菌，扩增。
4.铺板子，即LB板，里面会有抗生素，所以将均菌液涂板子后，带有目的基因的的细菌会继续增长。生长一般过夜
  差不多就这样吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-12-11 16:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:56
1.确定你要获得的酯酶的基因序列，然后设计引物，PCR对目的基因进行扩增。
2.一般载体可以选择质粒，用酶切将目的基因和质粒进行连接。
3.感受态细胞可以选择大肠杆菌，将连接好的质粒转化到细胞中，摇菌，让细菌生长。一般再送到公司进行测序。
4.铺板子，也就是LB板，可以选择性的使带有目的基因的细菌存活继续生长。
大致步骤就是 PCR--连接--转化
  恩 差不多就这样了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-12-11 16:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王龙蛋蛋 at 2013-12-11 16:49:03
1.确定你要获得的酯酶的基因序列，然后设计引物，PCR对目的基因进行扩增。
2.一般载体可以选择质粒，用酶切将目的基因和质粒进行连接。
3.感受态细胞可以选择大肠杆菌，将连接好的质粒转化到细胞中，摇菌，让细菌 ...

zenme确定目的基因的序列？我输入ferulic acid esterase（阿魏酸酯酶）有很多种，我想要的是乳酸菌中克隆出来的。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
6楼2013-12-12 22:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hahayou36532 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料292调剂 +3 橘颂思美人 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:36 by pswait
[考研] 一志愿陕师大生物学071000，298分，求调剂 +3 SYA！ 2026-03-23 3/150 2026-03-23 19:09 by macy2011
[考研] 07化学280分求调剂 +3 722865 2026-03-23 3/150 2026-03-23 18:48 by macy2011
[考研] 接收2026硕士调剂(学硕+专硕) +4 allen-yin 2026-03-23 6/300 2026-03-23 15:04 by 汪！？！
[考研] 0854 考研调剂 招生了！AI 方向 +3 pk3725069 2026-03-19 14/700 2026-03-23 14:44 by Jack_333
[考研] 0854电子信息求调剂 324 +3 Promise-jyl 2026-03-23 3/150 2026-03-23 13:43 by wangkm
[考研] 一志愿北京化工大学 070300 学硕 336分 求调剂 +5 vv迷 2026-03-22 5/250 2026-03-23 07:36 by Iveryant
[考研] 一志愿华中农业071010，总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 319求调剂 +4 小力气珂珂 2026-03-20 4/200 2026-03-22 15:53 by ColorlessPI
[考研] 275求调剂 +6 shansx 2026-03-22 8/400 2026-03-22 15:27 by barlinike
[考研] 求调剂 +5 Zhangbod 2026-03-21 7/350 2026-03-22 13:13 by Zhangbod
[考研] 0805 316求调剂 +3 大雪深藏 2026-03-18 3/150 2026-03-21 18:55 by 学员8dgXkO
[考研] 297求调剂 +3 喜欢还是不甘心 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:33 by 学员8dgXkO
[考研] 085601调剂 358分 +3 zzzzggh 2026-03-20 4/200 2026-03-21 10:21 by luoyongfeng
[考研] 332求调剂 +4 ydfyh 2026-03-17 4/200 2026-03-21 02:20 by JourneyLucky
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-03-18 6/300 2026-03-21 00:32 by JourneyLucky
[考研] 296求调剂 +6 www_q 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:56 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂 +9 何润采123 2026-03-18 11/550 2026-03-20 23:19 by JourneyLucky
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 317求调剂 +5 申子申申 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:26 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭