应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，分子生物学有些问题求解
61/1返回列表
查看: 1119  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

hahayou36532

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助，分子生物学有些问题求解 已有1人参与

1、PCR-RFLP 引物特殊要求：PCR产物的长度为什么是200-1000bp?           酶切后产物片断的大小差距为什么是100bp以上？
2、琼脂糖凝胶电泳分离0.2-10kb的DNA。还是0.2-20kb的DNA？            聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分离小于500nt（Nucleotide）的RNA。它的大小和KB有什么区别呢？
在线等大神解答。。。我学食品的对这个真不了解。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
开心就好
1楼 2013-12-07 18:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 21:22:24
hahayou36532: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢高材生， 2013-12-10 22:04:52
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-07 20:17:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-12-07 20:17:48
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp

大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否说下四步你的具体如何展开，试剂的用量这些细枝末节没必要说明，主要求一下思路。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
3楼2013-12-10 22:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by hahayou36532 at 2013-12-10 22:28:56
大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否 ...

1.确定你的那个酯酶的基因序列，设计引物，PCR扩增目的基因
2.选择载体，可用质粒，利用酶切将目的基因与载体连接。一般连接后要送到公司测序
3.将连接好的质粒转入感受态细胞，一般是大肠杆菌细胞。然后摇菌，扩增。
4.铺板子，即LB板，里面会有抗生素，所以将均菌液涂板子后，带有目的基因的的细菌会继续增长。生长一般过夜
  差不多就这样吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-12-11 16:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:56
1.确定你要获得的酯酶的基因序列，然后设计引物，PCR对目的基因进行扩增。
2.一般载体可以选择质粒，用酶切将目的基因和质粒进行连接。
3.感受态细胞可以选择大肠杆菌，将连接好的质粒转化到细胞中，摇菌，让细菌生长。一般再送到公司进行测序。
4.铺板子，也就是LB板，可以选择性的使带有目的基因的细菌存活继续生长。
大致步骤就是 PCR--连接--转化
  恩 差不多就这样了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-12-11 16:49:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王龙蛋蛋 at 2013-12-11 16:49:03
1.确定你要获得的酯酶的基因序列，然后设计引物，PCR对目的基因进行扩增。
2.一般载体可以选择质粒，用酶切将目的基因和质粒进行连接。
3.感受态细胞可以选择大肠杆菌，将连接好的质粒转化到细胞中，摇菌，让细菌 ...

zenme确定目的基因的序列？我输入ferulic acid esterase（阿魏酸酯酶）有很多种，我想要的是乳酸菌中克隆出来的。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
6楼2013-12-12 22:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hahayou36532 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:49 by 5BDX0d0WFp7t
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 3/150 2026-09-15 05:26 by 5BDX0d0WFp7t
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 6/300 2026-09-15 05:13 by 5BDX0d0WFp7t
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +6 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 8/400 2026-09-15 05:01 by mibUvS8DDCwf
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-15 05:00 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:33 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 23:13 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:25 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 4/200 2026-09-14 21:37 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[考博] 27秋季材料博士申请求助 10+3 Cahal1 2026-09-11 4/200 2026-09-14 08:50 by 北京莱茵编辑
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭