应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，分子生物学有些问题求解
51/1返回列表
查看: 1156  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助，分子生物学有些问题求解 已有1人参与

1、PCR-RFLP 引物特殊要求：PCR产物的长度为什么是200-1000bp?           酶切后产物片断的大小差距为什么是100bp以上？
2、琼脂糖凝胶电泳分离0.2-10kb的DNA。还是0.2-20kb的DNA？            聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分离小于500nt（Nucleotide）的RNA。它的大小和KB有什么区别呢？
在线等大神解答。。。我学食品的对这个真不了解。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
开心就好
1楼 2013-12-07 18:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王龙蛋蛋 at 2013-12-11 16:49:03
1.确定你要获得的酯酶的基因序列，然后设计引物，PCR对目的基因进行扩增。
2.一般载体可以选择质粒，用酶切将目的基因和质粒进行连接。
3.感受态细胞可以选择大肠杆菌，将连接好的质粒转化到细胞中，摇菌，让细菌 ...

zenme确定目的基因的序列？我输入ferulic acid esterase（阿魏酸酯酶）有很多种，我想要的是乳酸菌中克隆出来的。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
6楼2013-12-12 22:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 21:22:24
hahayou36532: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢高材生， 2013-12-10 22:04:52
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-07 20:17:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-12-07 20:17:48
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp

大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否说下四步你的具体如何展开，试剂的用量这些细枝末节没必要说明，主要求一下思路。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
3楼2013-12-10 22:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by hahayou36532 at 2013-12-10 22:28:56
大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否 ...

1.确定你的那个酯酶的基因序列，设计引物，PCR扩增目的基因
2.选择载体，可用质粒，利用酶切将目的基因与载体连接。一般连接后要送到公司测序
3.将连接好的质粒转入感受态细胞，一般是大肠杆菌细胞。然后摇菌，扩增。
4.铺板子，即LB板，里面会有抗生素，所以将均菌液涂板子后，带有目的基因的的细菌会继续增长。生长一般过夜
  差不多就这样吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-12-11 16:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[基金申请] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +3 wangyl_123 2026-10-10 6/300 2026-10-11 15:04 by Abin0406
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +3 好运来～9527 2026-10-10 5/250 2026-10-11 09:00 by 好运来～9527
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +5 13108017953 2026-10-08 5/250 2026-10-10 11:15 by wdwd123
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭