应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助，分子生物学有些问题求解
51/1返回列表
查看: 907  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)

[求助] 求助，分子生物学有些问题求解 已有1人参与

1、PCR-RFLP 引物特殊要求：PCR产物的长度为什么是200-1000bp?           酶切后产物片断的大小差距为什么是100bp以上？
2、琼脂糖凝胶电泳分离0.2-10kb的DNA。还是0.2-20kb的DNA？            聚丙烯酰胺凝胶电泳常用于分离小于500nt（Nucleotide）的RNA。它的大小和KB有什么区别呢？
在线等大神解答。。。我学食品的对这个真不了解。。。
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
开心就好
1楼 2013-12-07 18:48:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 王龙蛋蛋 at 2013-12-11 16:49:03
1.确定你要获得的酯酶的基因序列，然后设计引物，PCR对目的基因进行扩增。
2.一般载体可以选择质粒，用酶切将目的基因和质粒进行连接。
3.感受态细胞可以选择大肠杆菌，将连接好的质粒转化到细胞中，摇菌，让细菌 ...

zenme确定目的基因的序列？我输入ferulic acid esterase（阿魏酸酯酶）有很多种，我想要的是乳酸菌中克隆出来的。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
6楼2013-12-12 22:53:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答

gaoyang636

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-07 21:22:24
hahayou36532: 金币+3, ★★★很有帮助, 谢谢高材生， 2013-12-10 22:04:52
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp
赞一下 回复此楼
2楼2013-12-07 20:17:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hahayou36532

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by gaoyang636 at 2013-12-07 20:17:48
因为RFLP结果的差距需要通过跑胶看，片段大小差距明显一些(比如这里的100bp)，才好分辨。
RNA是单链，所以说nt，如果是双链dna，则一般用bp（base pair）作为长度单位。
1Kbp=1000bp

大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否说下四步你的具体如何展开，试剂的用量这些细枝末节没必要说明，主要求一下思路。。。
赞一下 回复此楼
开心就好
3楼2013-12-10 22:28:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王龙蛋蛋

新虫 (初入文坛)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-11 20:54:51
引用回帖:
3楼: Originally posted by hahayou36532 at 2013-12-10 22:28:56
大神，我还问你一个问题，如何用基因工程的方法从乳酸杆菌中克隆出阿魏酸酯酶？大概从下面四个步骤来做，
1、确定目的基因（包括乳酸菌菌种）
2、选择载体
3、确定受体细胞转化培养条件
4、筛选阳性菌落
可否 ...

1.确定你的那个酯酶的基因序列，设计引物，PCR扩增目的基因
2.选择载体，可用质粒，利用酶切将目的基因与载体连接。一般连接后要送到公司测序
3.将连接好的质粒转入感受态细胞，一般是大肠杆菌细胞。然后摇菌，扩增。
4.铺板子，即LB板，里面会有抗生素，所以将均菌液涂板子后，带有目的基因的的细菌会继续增长。生长一般过夜
  差不多就这样吧
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2013-12-11 16:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 6 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 298-一志愿中国农业大学-求调剂 +11 手机用户 2026-03-17 12/600 2026-03-23 23:51 by 热情沙漠
[考研] 求材料，环境专业调剂 +3 18567500178 2026-03-18 3/150 2026-03-23 23:50 by 热情沙漠
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +4 cccchenso 2026-03-23 4/200 2026-03-23 23:00 by 徐ckkk
[考研] 材料专硕英一数二306 +8 z1z2z3879 2026-03-18 8/400 2026-03-23 20:49 by baobaoye
[考研] 336化工调剂 +4 王大坦1 2026-03-23 5/250 2026-03-23 18:32 by allen-yin
[考研] 北科281学硕材料求调剂 +8 tcxiaoxx 2026-03-20 9/450 2026-03-23 12:16 by tcxiaoxx
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-18 6/300 2026-03-22 20:18 by edmund7
[考研] 08工科 320总分 求调剂 +11 梨花珞晚风 2026-03-17 11/550 2026-03-22 17:42 by luoyongfeng
[考研] 寻找调剂 +4 倔强芒? 2026-03-21 4/200 2026-03-22 16:14 by 木托莫露露
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 0703化学297求调剂 +3 Daisy☆ 2026-03-20 3/150 2026-03-21 17:45 by ColorlessPI
[考研] 材料 271求调剂 +5 展信悦_ 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:29 by 学员8dgXkO
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 299求调剂 +6 △小透明* 2026-03-17 6/300 2026-03-21 02:42 by JourneyLucky
[考研] 二本跨考郑大材料306英一数二 +3 z1z2z3879 2026-03-17 3/150 2026-03-21 02:29 by JourneyLucky
[考研] 274求调剂 +10 S.H1 2026-03-18 10/500 2026-03-20 23:51 by JourneyLucky
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-19 5/250 2026-03-19 23:51 by 23Postgrad
[考研] 一志愿中国海洋大学，生物学，301分，求调剂 +5 1孙悟空 2026-03-17 6/300 2026-03-19 23:46 by zcl123
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭