24小时热门版块排行榜    

查看: 3093  |  回复: 7

三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR单引物扩增问题

小弟做了几个1kb左右的目的片段的扩增pcr,没想到结果是这样,一个博士跟我说这是单引物扩增,还有可能退火温度太低等等,不是很具体,想问问懂行的或者以前遇到过这种问题的大神们,怎么避免,如何改进?
PCR单引物扩增问题
24-26,12.5.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我不会!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-09 08:35:22
1.重新设计引物
2.提高退火温度
借你一生好不好
2楼2013-12-05 21:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-12-05 21:36:47
1.重新设计引物
2.提高退火温度

嗯,我也这么想的,只是想问下,这种情况是什么原理。
我不会!
3楼2013-12-06 00:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ninor

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-06 14:39:02
这种应该就是非特异性扩增,可能跟你的引物设计有关,专一性不是很强.想要避免非常困难,因为你不可能在做试验前就知道扩增的结果. 一般要改进的话,可以提高退火温度,降低模板浓度或者降低引物浓度.当然有些时候如果你的pcr buffer 有问题的话也会导致这种情况。如果反复设计引物都不成功的话,就要考虑是否是模板出问题了。
4楼2013-12-06 01:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nancysea

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+3, 鼓励交流 2013-12-09 08:35:28
PCR很复杂,什么模板?marker分别多大?那两天带大小都是什么?两条带中和你预期的如果有一个一样的话,可以先回收,做个TA克隆测序看看,不能一概而论!即使非特异带有,有时候也正常,不影响你的目的
5楼2013-12-08 07:27:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by nancysea at 2013-12-08 07:27:49
PCR很复杂,什么模板?marker分别多大?那两天带大小都是什么?两条带中和你预期的如果有一个一样的话,可以先回收,做个TA克隆测序看看,不能一概而论!即使非特异带有,有时候也正常,不影响你的目的

嘿嘿,这些我知道。我只是不想去切胶回收啥的……想用引物漂漂亮亮的扩增出目的片段,发文章好放图片…………
我不会!
6楼2013-12-08 22:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

nancysea

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

水平高点的文章用不上这种图,没用
7楼2013-12-09 15:33:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

古城十字路

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
6楼: Originally posted by 三蛰 at 2013-12-08 22:40:29
嘿嘿,这些我知道。我只是不想去切胶回收啥的……想用引物漂漂亮亮的扩增出目的片段,发文章好放图片…………...

要真想用图,切胶回收连克隆转化测序,正确了直接用质粒扩。
好好做实验。
8楼2014-05-13 15:57:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 三蛰 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿中海洋材料工程专硕330分求调剂 +5 小材化本科 2026-03-18 5/250 2026-03-18 21:53 by 无懈可击111
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 26调剂/材料/英一数二/总分289/已过A区线 +7 步川酷紫123 2026-03-13 7/350 2026-03-18 17:12 by 尽舜尧1
[考研] 331求调剂(0703有机化学 +7 ZY-05 2026-03-13 8/400 2026-03-18 14:13 by 007_lilei
[考研] 070300化学319求调剂 +6 锦鲤0909 2026-03-17 6/300 2026-03-18 13:22 by Iveryant
[考研] 0703化学调剂 +3 妮妮ninicgb 2026-03-17 3/150 2026-03-18 10:29 by macy2011
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 285化工学硕求调剂(081700) +9 柴郡猫_ 2026-03-12 9/450 2026-03-17 10:18 by Sammy2
[考研] 11408 一志愿西电,277分求调剂 +3 zhouzhen654 2026-03-16 3/150 2026-03-17 07:03 by laoshidan
[考研] 304求调剂 +5 素年祭语 2026-03-15 5/250 2026-03-16 17:00 by 我的船我的海
[考研] 283求调剂 +10 小楼。 2026-03-12 14/700 2026-03-16 16:08 by 13811244083
[考研] 一志愿华中师范071000,325求调剂 +6 RuitingC 2026-03-12 6/300 2026-03-16 14:50 by 可淡不可忘
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 材料080500调剂求收留 +3 一颗meteor 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:54 by peike
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 土木第一志愿276求调剂,科研和技能十分丰富,求新兴方向的导师收留 +3 土木小天才 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:01 by JourneyLucky
[考研] 289求调剂 +3 李政莹 2026-03-12 3/150 2026-03-13 11:02 by 求调剂zz
[考研] 333求调剂 +3 152697 2026-03-12 4/200 2026-03-13 07:08 by Iveryant
信息提示
请填处理意见