24小时热门版块排行榜    

查看: 3094  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR单引物扩增问题

小弟做了几个1kb左右的目的片段的扩增pcr,没想到结果是这样,一个博士跟我说这是单引物扩增,还有可能退火温度太低等等,不是很具体,想问问懂行的或者以前遇到过这种问题的大神们,怎么避免,如何改进?
PCR单引物扩增问题
24-26,12.5.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我不会!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by nancysea at 2013-12-08 07:27:49
PCR很复杂,什么模板?marker分别多大?那两天带大小都是什么?两条带中和你预期的如果有一个一样的话,可以先回收,做个TA克隆测序看看,不能一概而论!即使非特异带有,有时候也正常,不影响你的目的

嘿嘿,这些我知道。我只是不想去切胶回收啥的……想用引物漂漂亮亮的扩增出目的片段,发文章好放图片…………
我不会!
6楼2013-12-08 22:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-09 08:35:22
1.重新设计引物
2.提高退火温度
借你一生好不好
2楼2013-12-05 21:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-12-05 21:36:47
1.重新设计引物
2.提高退火温度

嗯,我也这么想的,只是想问下,这种情况是什么原理。
我不会!
3楼2013-12-06 00:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ninor

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-06 14:39:02
这种应该就是非特异性扩增,可能跟你的引物设计有关,专一性不是很强.想要避免非常困难,因为你不可能在做试验前就知道扩增的结果. 一般要改进的话,可以提高退火温度,降低模板浓度或者降低引物浓度.当然有些时候如果你的pcr buffer 有问题的话也会导致这种情况。如果反复设计引物都不成功的话,就要考虑是否是模板出问题了。
4楼2013-12-06 01:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 304求调剂 +6 司空. 2026-03-18 6/300 2026-03-18 23:03 by 星空星月
[考研] 311求调剂 +4 冬十三 2026-03-18 4/200 2026-03-18 21:47 by 尽舜尧1
[考研] 328求调剂,英语六级551,有科研经历 +3 生物工程调剂 2026-03-17 7/350 2026-03-18 20:41 by Wangjingyue
[考研] 0703化学调剂 +7 妮妮ninicgb 2026-03-15 11/550 2026-03-18 19:48 by macy2011
[考研] 材料与化工一志愿南昌大学327求调剂推荐 +8 Ncdx123456 2026-03-13 9/450 2026-03-18 14:40 by haxia
[考研] 293求调剂 +11 zjl的号 2026-03-16 16/800 2026-03-18 08:10 by zhukairuo
[考研] 308求调剂 +4 是Lupa啊 2026-03-16 4/200 2026-03-17 17:12 by ruiyingmiao
[考博] 26申博 +4 八旬速览 2026-03-16 4/200 2026-03-17 13:00 by 轻松不少随
[考研] 一志愿南京大学,080500材料科学与工程,调剂 +4 Jy? 2026-03-16 4/200 2026-03-17 11:02 by gaoqiong
[考研] [导师推荐]西南科技大学国防/材料导师推荐 +3 尖角小荷 2026-03-16 6/300 2026-03-16 23:21 by 尖角小荷
[考研] 机械专硕325,寻找调剂院校 +3 y9999 2026-03-15 5/250 2026-03-16 19:58 by y9999
[考研] 085600调剂 +5 漾漾123sun 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:58 by 漾漾123sun
[考研] 277材料科学与工程080500求调剂 +3 自由煎饼果子 2026-03-16 3/150 2026-03-16 14:10 by 运气yunqi
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 080500,材料学硕302分求调剂学校 +4 初识可乐 2026-03-14 5/250 2026-03-14 21:08 by peike
[考研] 复试调剂 +3 呼呼?~+123456 2026-03-14 3/150 2026-03-14 16:53 by WTUChen
[考研] 311求调剂 +3 冬十三 2026-03-13 3/150 2026-03-13 20:41 by JourneyLucky
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 274求调剂 +3 S.H1 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:15 by JourneyLucky
[考研] 321求调剂(食品/专硕) +3 xc321 2026-03-12 6/300 2026-03-13 08:45 by xc321
信息提示
请填处理意见