24小时热门版块排行榜    

查看: 3258  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

[求助] PCR单引物扩增问题

小弟做了几个1kb左右的目的片段的扩增pcr,没想到结果是这样,一个博士跟我说这是单引物扩增,还有可能退火温度太低等等,不是很具体,想问问懂行的或者以前遇到过这种问题的大神们,怎么避免,如何改进?
PCR单引物扩增问题
24-26,12.5.png
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

我不会!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by nancysea at 2013-12-08 07:27:49
PCR很复杂,什么模板?marker分别多大?那两天带大小都是什么?两条带中和你预期的如果有一个一样的话,可以先回收,做个TA克隆测序看看,不能一概而论!即使非特异带有,有时候也正常,不影响你的目的

嘿嘿,这些我知道。我只是不想去切胶回收啥的……想用引物漂漂亮亮的扩增出目的片段,发文章好放图片…………
我不会!
6楼2013-12-08 22:40:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-12-09 08:35:22
1.重新设计引物
2.提高退火温度
借你一生好不好
2楼2013-12-05 21:36:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三蛰

铜虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-12-05 21:36:47
1.重新设计引物
2.提高退火温度

嗯,我也这么想的,只是想问下,这种情况是什么原理。
我不会!
3楼2013-12-06 00:29:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ninor

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-06 14:39:02
这种应该就是非特异性扩增,可能跟你的引物设计有关,专一性不是很强.想要避免非常困难,因为你不可能在做试验前就知道扩增的结果. 一般要改进的话,可以提高退火温度,降低模板浓度或者降低引物浓度.当然有些时候如果你的pcr buffer 有问题的话也会导致这种情况。如果反复设计引物都不成功的话,就要考虑是否是模板出问题了。
4楼2013-12-06 01:29:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见,大家看看几个A,几个B? +4 Tide man 2026-08-11 4/200 2026-08-12 00:39 by liuqidi
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 9/450 2026-08-11 22:12 by 医学老男孩
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[基金申请] 帮忙看看fileCode +7 wwncly 2026-08-10 13/650 2026-08-11 19:36 by 冰心玉壶晴
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[论文投稿] 职称评审,求友友推荐见刊最快的期刊 +3 工厂打螺丝 2026-08-08 3/150 2026-08-11 13:42 by 会议编辑
[基金申请] 听说今天filecode变了 +26 布布和一二 2026-08-06 49/2450 2026-08-11 13:18 by WH3796
[基金申请] FileCode能看出啥? +7 要乐观耀哥 2026-08-10 17/850 2026-08-11 10:50 by 要乐观耀哥
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode,很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 固定端突然变了,今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] 影响面上的因素 +8 布布和一二 2026-08-05 11/550 2026-08-06 10:41 by 宝贝虫子
信息提示
请填处理意见