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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE两条带，Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗？
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小李爱学习

银虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE两条带，Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗？

我用DEAE-Sepharose和Superdex 200从芒果果实中分离纯化了一个具有分解蔗糖活性的蔗糖转化酶。类似的文献中说这个酶是糖蛋白。我做SDS电泳（考染）时显示的是分子量分别为45kDa和50kDa，不同浓度的两条带，做Native-PAGE时结果显示分子量大约为150kDa是一条带。这种结果有没有可能是这个蛋白是有分子量分别为45kDa和50kDa两种不同亚基组成的蛋白？这样可以证明得到的是一个蛋白吗？能证明蛋白是纯的吗？请各位高人指点
SDS-PAGE两条带，Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗？
Native-PAGE截图网页版.jpg


SDS-PAGE两条带，Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗？-1
SDS-PAGE截图网页.jpg
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1楼 2013-12-03 14:15:53
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小李爱学习: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-03 16:59:41
有可能是你说的情况，有文献报导说这个酶是多亚基复合体吗？
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2楼2013-12-03 15:56:10
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小李爱学习

银虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-03 15:56:10
有可能是你说的情况，有文献报导说这个酶是多亚基复合体吗？

不同来源的这种酶的文献报道大多都是同种亚基组成；有篇文献报道结果SDS是3条带，作者通过指纹图谱鉴定和免疫反应，得出SDS电泳过程中一条肽链分解成了2条不同分子量的肽链。
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3楼2013-12-03 16:59:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 小李爱学习 at 2013-12-03 16:59:24
不同来源的这种酶的文献报道大多都是同种亚基组成；有篇文献报道结果SDS是3条带，作者通过指纹图谱鉴定和免疫反应，得出SDS电泳过程中一条肽链分解成了2条不同分子量的肽链。...

从你的Native-PAGE上看，大致可以说是一个复合体了，你的SDS-PAGE上有两条带，可能是两种不同亚基，也可能是一种亚基有不同的修饰。试试做一下质谱和免疫鉴定进一步确定一下。
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4楼2013-12-04 01:16:12
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小李爱学习

银虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-04 01:16:12
从你的Native-PAGE上看，大致可以说是一个复合体了，你的SDS-PAGE上有两条带，可能是两种不同亚基，也可能是一种亚基有不同的修饰。试试做一下质谱和免疫鉴定进一步确定一下。...

好的 谢谢 这一步正在进行。
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5楼2013-12-04 18:17:26
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牛焕杰

银虫 (小有名气)
你好，我的情况也跟你差不多，也是在SDS-PAGE上跑出来两个条带，在Native-PAGE上就只有一个条带，能说明这个蛋白是有两个亚基吗？可以说蛋白已经达到电泳纯了吗？希望得到你的帮助
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6楼2014-10-20 21:00:27
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牛焕杰

银虫 (小有名气)
还有你提到的“做Native-PAGE时结果显示分子量大约为150kDa是一条带”，你在Native-PAGE胶上怎么确定分子量的？
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7楼2014-10-20 21:01:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
引用回帖:
7楼: Originally posted by 牛焕杰 at 2014-10-20 21:01:59
还有你提到的“做Native-PAGE时结果显示分子量大约为150kDa是一条带”，你在Native-PAGE胶上怎么确定分子量的？

Native-PAGE胶上不能确定分子量，因为迁移率受所带电荷影响，就是等电点影响。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2015-01-08 23:03:30
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