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小李爱学习

银虫 (正式写手)

[求助] SDS-PAGE两条带,Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗?

我用DEAE-Sepharose和Superdex 200从芒果果实中分离纯化了一个具有分解蔗糖活性的蔗糖转化酶。类似的文献中说这个酶是糖蛋白。我做SDS电泳(考染)时显示的是分子量分别为45kDa和50kDa,不同浓度的两条带,做Native-PAGE时结果显示分子量大约为150kDa是一条带。这种结果有没有可能是这个蛋白是有分子量分别为45kDa和50kDa两种不同亚基组成的蛋白?这样可以证明得到的是一个蛋白吗?能证明蛋白是纯的吗?请各位高人指点
SDS-PAGE两条带,Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗?
Native-PAGE截图网页版.jpg


SDS-PAGE两条带,Native-PAGE一条带能证明蛋白是纯的吗?-1
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小李爱学习: 金币+3, ★★★很有帮助 2013-12-03 16:59:41
有可能是你说的情况,有文献报导说这个酶是多亚基复合体吗?
2楼2013-12-03 15:56:10
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小李爱学习

银虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-03 15:56:10
有可能是你说的情况,有文献报导说这个酶是多亚基复合体吗?

不同来源的这种酶的文献报道大多都是同种亚基组成;有篇文献报道结果SDS是3条带,作者通过指纹图谱鉴定和免疫反应,得出SDS电泳过程中一条肽链分解成了2条不同分子量的肽链。
3楼2013-12-03 16:59:24
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 小李爱学习 at 2013-12-03 16:59:24
不同来源的这种酶的文献报道大多都是同种亚基组成;有篇文献报道结果SDS是3条带,作者通过指纹图谱鉴定和免疫反应,得出SDS电泳过程中一条肽链分解成了2条不同分子量的肽链。...

从你的Native-PAGE上看,大致可以说是一个复合体了,你的SDS-PAGE上有两条带,可能是两种不同亚基,也可能是一种亚基有不同的修饰。试试做一下质谱和免疫鉴定进一步确定一下。
4楼2013-12-04 01:16:12
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小李爱学习

银虫 (正式写手)

引用回帖:
4楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-12-04 01:16:12
从你的Native-PAGE上看,大致可以说是一个复合体了,你的SDS-PAGE上有两条带,可能是两种不同亚基,也可能是一种亚基有不同的修饰。试试做一下质谱和免疫鉴定进一步确定一下。...

好的 谢谢 这一步正在进行。
5楼2013-12-04 18:17:26
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牛焕杰

银虫 (小有名气)

你好,我的情况也跟你差不多,也是在SDS-PAGE上跑出来两个条带,在Native-PAGE上就只有一个条带,能说明这个蛋白是有两个亚基吗?可以说蛋白已经达到电泳纯了吗?希望得到你的帮助
6楼2014-10-20 21:00:27
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牛焕杰

银虫 (小有名气)

还有你提到的“做Native-PAGE时结果显示分子量大约为150kDa是一条带”,你在Native-PAGE胶上怎么确定分子量的?
7楼2014-10-20 21:01:59
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

引用回帖:
7楼: Originally posted by 牛焕杰 at 2014-10-20 21:01:59
还有你提到的“做Native-PAGE时结果显示分子量大约为150kDa是一条带”,你在Native-PAGE胶上怎么确定分子量的?

Native-PAGE胶上不能确定分子量,因为迁移率受所带电荷影响,就是等电点影响。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
8楼2015-01-08 23:03:30
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