应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PGEX-6P-1 载体构建 求帮忙
111/2返回列表12下一页
查看: 3116  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] PGEX-6P-1 载体构建 求帮忙

情况是这样的，有个老师设计好的引物给我，让我克隆表达一个蛋白。我构建好几个载体准备开始表达，回头看发现下游引物有点问题。结果导致克隆进载体的目的基因的碱基数不是3的倍数，多出了一个碱基。也就是说向下移码了一位。

想请问大神们，这样还能做表达吗？这关系到我是继续往下做western还是重头开始。
我用重组PGEX-6P-1质粒SDS-PAGE发现很像蛋白表达出来了。

我在PGEX-6P-1多克隆位点下游发现这样的序列TGA C TGA C TGA，连续三个终止密码子，这是不是代表就算移码也没关系，我的蛋白有可能表达呢？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-12-01 18:44:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

yinchu1990

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-01 19:20:50
windleakey: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-12-02 21:23:00
是啊 下游没关系的
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2013-12-01 18:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yinchu1990

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by windleakey at 2013-12-01 19:30:52
真的吗 要真是这样就太好了 请问这是个别质粒的特性 还是所有质粒都是这样的 因为我构建了好几个质粒...

一般没问题的，后面应该都会有密码子的，不过最好还是不要移码，不然会多一些氨基酸
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

windleakey
7楼2013-12-01 21:51:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sinoer

铜虫 (小有名气)
TGA C TGA C TGA
这个载体可以，其他的不一定
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2013-12-02 01:10:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
普通回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助，帮助虫子 2013-12-01 20:09:12
“结果导致克隆进载体的目的基因的碱基数不是3的倍数，多出了一个碱基。也就是说向下移码了一位。”能够说的再详细一点，这个多出来的一个碱基是在终止密码子前面还是后面呢？后面的话，是不影响的
赞一下 回复此楼
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-12-01 19:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yinchu1990 at 2013-12-01 18:49:04
是啊 下游没关系的

真的吗 要真是这样就太好了 请问这是个别质粒的特性 还是所有质粒都是这样的 因为我构建了好几个质粒
赞一下 回复此楼
4楼2013-12-01 19:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-01 19:21:53
“结果导致克隆进载体的目的基因的碱基数不是3的倍数，多出了一个碱基。也就是说向下移码了一位。”能够说的再详细一点，这个多出来的一个碱基是在终止密码子前面还是后面呢？后面的话，是不影响的

感谢回复，我做分子时间不久所以很多地方可能有问题。我构建之前都没有考虑终止子位置的问题。
多出的这一个碱基是克隆进载体的目的基因的最后一个碱基，也就是双酶切位点中后一个酶切位点前面一个碱基。所以应该是在终止密码子的前面。
赞一下 回复此楼
5楼2013-12-01 19:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zh10246

铁杆木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-12-02 01:39:44
引用回帖:
5楼: Originally posted by windleakey at 2013-12-01 19:39:16
感谢回复，我做分子时间不久所以很多地方可能有问题。我构建之前都没有考虑终止子位置的问题。
多出的这一个碱基是克隆进载体的目的基因的最后一个碱基，也就是双酶切位点中后一个酶切位点前面一个碱基。所以应该 ...

多出的这一个碱基是克隆进载体的目的基因的最后一个碱基，也就是双酶切位点中后一个酶切位点前面一个碱基。所以应该是在终止密码子的前面。
你要考虑目的蛋白是否提前终止和通读（READ THROUGH）.从你的描述看，可能没有提前终止，你要确认有没有终止密码字，因为多了一个碱基，载体本身的终止密码字可能移码了，你克隆基因的时候有没有包含终止密码子？
赞一下 回复此楼
6楼2013-12-01 20:49:08
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by zh10246 at 2013-12-01 20:49:08
多出的这一个碱基是克隆进载体的目的基因的最后一个碱基，也就是双酶切位点中后一个酶切位点前面一个碱基。所以应该是在终止密码子的前面。
你要考虑目的蛋白是否提前终止和通读（READ THROUGH）.从你的描述看，可 ...

恩 克隆的基因没有终止密码子 只能指望质粒上的终止密码子了 这部分终于明白了 谢谢了
赞一下 回复此楼
9楼2013-12-02 21:21:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by yinchu1990 at 2013-12-01 21:51:20
一般没问题的，后面应该都会有密码子的，不过最好还是不要移码，不然会多一些氨基酸...

恩 终于明白了 谢谢了
赞一下 回复此楼
10楼2013-12-02 21:21:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 windleakey 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿东华大学化学070300，求调剂 +7 2117205181 2026-03-21 8/400 2026-03-22 22:55 by chixmc
[考研] 求调剂一志愿海大，0703化学学硕304分，有大创项目，四级已过 +6 幸运哩哩 2026-03-22 10/500 2026-03-22 20:10 by edmund7
[考研] 一志愿中南化学（0703）总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 324求调剂 +6 lucky呀呀呀鸭 2026-03-20 6/300 2026-03-22 16:01 by ColorlessPI
[考研] 311求调剂 +3 26研0 2026-03-20 3/150 2026-03-22 14:46 by ColorlessPI
[考研] 一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂 +5 vv迷 2026-03-21 8/400 2026-03-22 14:20 by ColorlessPI
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +4 NIFFFfff 2026-03-20 4/200 2026-03-22 09:49 by 2026paper
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 280求调剂 +11 咕噜晓晓 2026-03-18 12/600 2026-03-21 22:40 by ACS Nano——
[考研] 工科0856求调剂 +3 沐析汀汀 2026-03-21 3/150 2026-03-21 18:30 by 学员8dgXkO
[考研] 336求调剂 +5 rmc8866 2026-03-21 5/250 2026-03-21 17:24 by 学员8dgXkO
[考研] 268求调剂 +9 简单点0 2026-03-17 9/450 2026-03-21 15:37 by lature00
[考研] 22 350 本科985求调剂，求老登收留 +3 李轶男003 2026-03-20 3/150 2026-03-21 13:28 by 搏击518
[考研] 330求调剂0854 +3 assdll 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:01 by 搏击518
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 086500 325 求调剂 +3 领带小熊 2026-03-19 3/150 2026-03-20 18:38 by 尽舜尧1
[考研] 0703化学调剂 +5 pupcoco 2026-03-17 8/400 2026-03-19 13:58 by houyaoxu
[考研] 一志愿福大288有机化学，求调剂 +3 小木虫200408204 2026-03-18 3/150 2026-03-19 13:31 by houyaoxu
[考研] 有没有道铁/土木的想调剂南林，给自己招师弟中～ +3 TqlXswl 2026-03-16 7/350 2026-03-17 15:23 by TqlXswl
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭