24小时热门版块排行榜    

北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
查看: 3128  |  回复: 10
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

[求助] PGEX-6P-1 载体构建 求帮忙

情况是这样的,有个老师设计好的引物给我,让我克隆表达一个蛋白。我构建好几个载体准备开始表达,回头看发现下游引物有点问题。结果导致克隆进载体的目的基因的碱基数不是3的倍数,多出了一个碱基。也就是说向下移码了一位。

想请问大神们,这样还能做表达吗?这关系到我是继续往下做western还是重头开始。
我用重组PGEX-6P-1质粒SDS-PAGE发现很像蛋白表达出来了。

我在PGEX-6P-1多克隆位点下游发现这样的序列TGA C TGA C TGA,连续三个终止密码子,这是不是代表就算移码也没关系,我的蛋白有可能表达呢?
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+1, 感谢发帖应助,帮助虫子 2013-12-01 20:09:12
“结果导致克隆进载体的目的基因的碱基数不是3的倍数,多出了一个碱基。也就是说向下移码了一位。”能够说的再详细一点,这个多出来的一个碱基是在终止密码子前面还是后面呢?后面的话,是不影响的
学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
3楼2013-12-01 19:21:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

yinchu1990

铜虫 (小有名气)


【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-12-01 19:20:50
windleakey: 金币+10, ★★★★★最佳答案 2013-12-02 21:23:00
是啊 下游没关系的
2楼2013-12-01 18:49:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yinchu1990 at 2013-12-01 18:49:04
是啊 下游没关系的

真的吗 要真是这样就太好了 请问这是个别质粒的特性 还是所有质粒都是这样的 因为我构建了好几个质粒
4楼2013-12-01 19:30:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

windleakey

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by gyesang at 2013-12-01 19:21:53
“结果导致克隆进载体的目的基因的碱基数不是3的倍数,多出了一个碱基。也就是说向下移码了一位。”能够说的再详细一点,这个多出来的一个碱基是在终止密码子前面还是后面呢?后面的话,是不影响的

感谢回复,我做分子时间不久所以很多地方可能有问题。我构建之前都没有考虑终止子位置的问题。
多出的这一个碱基是克隆进载体的目的基因的最后一个碱基,也就是双酶切位点中后一个酶切位点前面一个碱基。所以应该是在终止密码子的前面。
5楼2013-12-01 19:39:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 求调剂 +6 白QF 2026-03-21 7/350 2026-03-28 00:42 by 白QF
[考研] 085602 307分 求调剂 +6 不知道叫什么! 2026-03-26 6/300 2026-03-27 22:00 by 催化大白
[考研] 291求调剂 +6 孅華 2026-03-22 6/300 2026-03-27 19:56 by WYUMater
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 299求调剂 +6 嗯嗯嗯嗯2 2026-03-27 6/300 2026-03-27 12:43 by 果果妈咪
[考研] 22408 359分调剂 +3 Qshers 2026-03-27 3/150 2026-03-27 12:22 by wxiongid
[考研] 329求调剂 +4 星野? 2026-03-26 4/200 2026-03-27 12:00 by 不吃魚的貓
[考研] 材料学硕333求调剂 +8 北道巷 2026-03-24 8/400 2026-03-27 10:18 by 我是小康
[考研] 求调剂 +6 林之夕 2026-03-24 6/300 2026-03-27 08:38 by hypershenger
[考研] 317求调剂 +7 蛋黄咸肉粽 2026-03-26 7/350 2026-03-27 02:29 by fmesaito
[考研] 336材料求调剂 +7 陈滢莹 2026-03-26 9/450 2026-03-27 00:20 by wxiongid
[考研] 325求调剂 +3 Aoyijiang 2026-03-23 3/150 2026-03-26 20:46 by 不吃魚的貓
[考研] 321求调剂 +5 材料cailiao 2026-03-21 5/250 2026-03-26 20:41 by fmesaito
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 机械学硕310分,数一英一,一志愿211本科双非找调剂信息 +3 @357 2026-03-25 3/150 2026-03-26 16:34 by by.MENG
[考研] 生物技术与工程 +3 1294608413 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:02 by 1294608413
[考研] 300分,材料,求调剂,英一数二 +5 超赞的 2026-03-24 5/250 2026-03-24 21:07 by 星空星月
[考研] 080500求调剂 +3 zzzzfan 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:38 by barlinike
[考研] 291求调剂 +3 HanBeiNingZC 2026-03-24 3/150 2026-03-24 16:34 by barlinike
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
信息提示
请填处理意见