应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3‘race的怪异现象
51/1返回列表
查看: 1542  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

ptccc

铜虫 (初入文坛)

[求助] 3‘race的怪异现象

最近做了一个月的3’race，跌跌撞撞，一直栽在同一个问题上。第一次用GSP扩增出大概有200bp的条带，连接T载体后转化测序，只得到大概130bp的片段，后面有22个A，A后面接着3‘接头；A前面的碱基序列都是对的，也就是CAAGGGCTGCCTTAGCTGTCAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，无终止密码，而且CDS也应该还差十几个碱基。我重新设了引物再一次做，怪异的现象出来了，出来的后面序列也是一模一样，就是一到CAAGGGCTGCCTTAGCTGTCAAGAA就直接出现POLY a了。GAA后面的几个氨基酸死活出不来，那POLY A是怎么出来的呀！！！！！两次都有做过巢式，测序到GAA也是没有后面的几个碱基。这是为什么呀~~~求助~~~研一的孩子对实验都没热情了。。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

RACE

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-29 14:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨惠源

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by ptccc at 2013-11-29 14:47:48
最近做了一个月的3’race，跌跌撞撞，一直栽在同一个问题上。第一次用GSP扩增出大概有200bp的条带，连接T载体后转化测序，只得到大概130bp的片段，后面有22个A，A后面接着3‘接头；A前面的碱基序列都是对的，也就是 ...

题主，看到你多年前的帖子，，，我现在也出现了相同的问题，不知道当时你是怎么解决的阿，求赐教阿，不胜感激。自己快愁哭了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-01-17 02:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

rodickholm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-29 17:15:08
ptccc: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-29 20:30:46
应该是合成3‘RACE模板的时候，POLY-T提前加到尾巴前面了，即错配了。可以换新RNA重新合成，还不行只能换一家公司的3’接头重新RT合成模板。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-11-29 16:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ptccc: 金币+2, ★有帮助 2013-11-29 20:30:56
GAA后的序列应该是什么？
用的哪家的试剂盒？
也可能是剪切位点就是这样
赞一下 回复此楼
借你一生好不好
3楼2013-11-29 19:35:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptccc

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rodickholm at 2013-11-29 16:21:50
应该是合成3‘RACE模板的时候，POLY-T提前加到尾巴前面了，即错配了。可以换新RNA重新合成，还不行只能换一家公司的3’接头重新RT合成模板。

谢谢您的答复。
我曾经怀疑过这个，但是这个模板是师兄师姐之前弄好的，他们也用过，应该没什么问题吧。不过这也是一个参考。我明天换一个模板试试看。谢谢~
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-29 20:27:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭