应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 3‘race的怪异现象
71/1返回列表
查看: 1438  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

ptccc

铜虫 (初入文坛)

[求助] 3‘race的怪异现象

最近做了一个月的3’race，跌跌撞撞，一直栽在同一个问题上。第一次用GSP扩增出大概有200bp的条带，连接T载体后转化测序，只得到大概130bp的片段，后面有22个A，A后面接着3‘接头；A前面的碱基序列都是对的，也就是CAAGGGCTGCCTTAGCTGTCAAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA，无终止密码，而且CDS也应该还差十几个碱基。我重新设了引物再一次做，怪异的现象出来了，出来的后面序列也是一模一样，就是一到CAAGGGCTGCCTTAGCTGTCAAGAA就直接出现POLY a了。GAA后面的几个氨基酸死活出不来，那POLY A是怎么出来的呀！！！！！两次都有做过巢式，测序到GAA也是没有后面的几个碱基。这是为什么呀~~~求助~~~研一的孩子对实验都没热情了。。。。
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

RACE

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-29 14:47:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

rodickholm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，分子生物期待你更多精彩。 2013-11-29 17:15:08
ptccc: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-11-29 20:30:46
应该是合成3‘RACE模板的时候，POLY-T提前加到尾巴前面了，即错配了。可以换新RNA重新合成，还不行只能换一家公司的3’接头重新RT合成模板。
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2013-11-29 16:21:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

不叶珏

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
ptccc: 金币+2, ★有帮助 2013-11-29 20:30:56
GAA后的序列应该是什么？
用的哪家的试剂盒？
也可能是剪切位点就是这样
赞一下 回复此楼
借你一生好不好
3楼2013-11-29 19:35:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptccc

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by rodickholm at 2013-11-29 16:21:50
应该是合成3‘RACE模板的时候，POLY-T提前加到尾巴前面了，即错配了。可以换新RNA重新合成，还不行只能换一家公司的3’接头重新RT合成模板。

谢谢您的答复。
我曾经怀疑过这个，但是这个模板是师兄师姐之前弄好的，他们也用过，应该没什么问题吧。不过这也是一个参考。我明天换一个模板试试看。谢谢~
赞一下 回复此楼
4楼2013-11-29 20:27:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

ptccc

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 不叶珏 at 2013-11-29 19:35:09
GAA后的序列应该是什么？
用的哪家的试剂盒？
也可能是剪切位点就是这样

近缘物种中GAA后的还有九个编码Lys的氨基酸，近源物种中是GAAGAAGAA，但是后来我怀疑过会不会是AAA编码的Lys，但是这一连串A后面直接是接头引物，我就很疑惑了。
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-29 20:29:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

夜舞龙

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
个人意见：CAAGAAGAAGAA 这样重复的序列可能带来测序错误，从另一个方向测序试试，看看你说的后边那几个碱基从另一个方向测存在不。
赞一下 回复此楼
6楼2013-11-29 21:13:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

杨惠源

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by ptccc at 2013-11-29 14:47:48
最近做了一个月的3’race，跌跌撞撞，一直栽在同一个问题上。第一次用GSP扩增出大概有200bp的条带，连接T载体后转化测序，只得到大概130bp的片段，后面有22个A，A后面接着3‘接头；A前面的碱基序列都是对的，也就是 ...

题主，看到你多年前的帖子，，，我现在也出现了相同的问题，不知道当时你是怎么解决的阿，求赐教阿，不胜感激。自己快愁哭了

发自小木虫Android客户端
赞一下 回复此楼
7楼2018-01-17 02:13:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 ptccc 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 今天基金会出结果吗？20260819 +13 kkkl_v 2026-08-19 13/650 2026-08-19 22:37 by 宝贝虫子
[基金申请] 时间戳变了，能看出什么问题？ +12 基诺咪客 2026-08-17 16/800 2026-08-19 22:04 by kk 的小木虫
[基金申请] filecode，4个jtjc了 +11 ziyangfang 2026-08-19 13/650 2026-08-19 21:28 by aasahr
[教师之家] 为什么余额宝的年化利率越来越低？主要原因有哪些？ +5 瞬息宇宙 2026-08-15 5/250 2026-08-19 20:23 by super2002521
[基金申请] 今天放榜没戏了吧 +4 yuleib84 2026-08-19 5/250 2026-08-19 19:52 by hhs666
[基金申请] 今天放榜吗？ +14 布布和一二 2026-08-19 15/750 2026-08-19 18:07 by gltch
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +10 wangze12014 2026-08-14 12/600 2026-08-19 16:56 by 苦难博士
[基金申请] 2027广东省杰青 +4 奶牛小黑 2026-08-15 10/500 2026-08-19 11:02 by wanfengnew
[基金申请] 快农历七夕节了，轻松一下，男人悄悄话，女施主请不要进来。 +6 Tide man 2026-08-14 7/350 2026-08-19 09:56 by ZJTJZ
[基金申请] 什么时候开奖？ +6 CrisMessi 2026-08-18 6/300 2026-08-19 08:06 by Equinoxhua
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +10 yuleib84 2026-08-18 11/550 2026-08-19 07:30 by 羽毛枫f
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[论文投稿] 投稿咨询 +4 wwm09 2026-08-17 6/300 2026-08-18 15:36 by wwm09
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +13 Ldrop2023 2026-08-13 16/800 2026-08-18 12:25 by 淀粉搬运工
[基金申请] 93BebMhtakh前后11位开头都是大写 +4 且听虎啸 2026-08-17 5/250 2026-08-18 00:49 by 蔡棒棒菂
[基金申请] 感觉是下周放榜了 +6 angus9576 2026-08-17 11/550 2026-08-17 23:57 by angus9576
[基金申请] 今天系统多次维护，明天很可能放榜！ +8 zju2000 2026-08-16 9/450 2026-08-17 12:20 by lmz0216
[精细化工] 招聘 金属平磨液，抛光液研发工程师 +3 小天0311 2026-08-14 3/150 2026-08-16 07:31 by H9PLUS
[基金申请] 各位道友，我要去昆明玩几天，回来见。 +7 Tide man 2026-08-14 8/400 2026-08-15 01:11 by arzu_hma
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭