| 查看: 2798 | 回复: 4 | ||
[求助]
求高手帮忙解答荧光定量PCR融解曲线、标准曲线和样品浓度问题
|
最近一直在做定量PCR，跑了很多次，总是出现问题，求高手帮忙解决 表样和DNA样品26.jpg  标样溶解曲线.png  标样和样品扩增曲线.png  标准曲线.png |
回复此楼» 猜你喜欢
科研人必读：新一代 KRAS G12C 抑制剂 Olomorasib 的研究进展
已经有0人回复
-
BT-11（Omilancor）研究化合物全解析：从分子结构到实验应用要点
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有204人回复
-
富马酸贝达喹啉：二芳基喹啉类工具化合物的化学特征
已经有0人回复
-
BT投稿with editor状态快两周了，正常吗
已经有25人回复
-
Silevertinib（BDTX-1535）结构拆解：炔基双环片段为何成为合成瓶颈
已经有0人回复
-
RO4929097 解析：双苯并氮杂䓬骨架与 Notch 通路实验设计要点
已经有0人回复
-
分子量 1157 的 PROTAC 怎么配不析出：SGK3-PROTAC1 的溶解、分装与图谱复核
已经有0人回复
-
logP 6.1 的羧酸怎么配母液：GSK 650394 的溶解窗口与稀释顺序
已经有0人回复
-
从"水不溶"到 71 mg/mL：雷特格韦的 pH 依赖溶解与螯合色谱边界
已经有0人回复
-
133 Ų 的极性表面积，如何决定 TNG462 的母液配制与色谱条件
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求教，荧光定量PCR标曲问题
已经有16人回复
- 求助荧光定量扩增曲线分析，谢谢！
已经有4人回复
- 荧光定量PCR扩增曲线怎么成这样了呢？为什么?
已经有15人回复
- 定量PCR融解曲线问题
已经有4人回复
- 实时荧光定量PCR过程问题
已经有11人回复
- 荧光定量扩增效率问题
已经有6人回复
- 求助！荧光定量PCR标准曲线制作至少要几个梯度
已经有6人回复
- 荧光定量阴性对照
已经有4人回复
- 绝对定量荧光PCR中做标准曲线的DNA的获得。
已经有10人回复
- 为什么荧光定量PCR扩增曲线呈倒S型
已经有27人回复
- 定量PCR-引物二聚体问题
已经有5人回复
- 荧光定量溶解曲线怎么回事？
已经有11人回复
- QPCR 溶解曲线
已经有9人回复
- 荧光定量PCR扩增曲线不光滑
已经有8人回复
- 荧光定量pcr溶解曲线好几个峰，但是电泳只有一条目的条带，怎么回事
已经有5人回复
- 荧光pcr标准曲线问题
已经有21人回复
- 荧光定量PCR的扩增曲线很奇怪，什么原因
已经有7人回复
- RT-PCR扩增图和溶解曲线跑成这样
已经有12人回复
- 荧光定量PCR标准曲线制作
已经有10人回复
- 标准菌株建立荧光定量PCR的标准曲线
已经有5人回复
- 荧光定量PCR标准曲线制作的注意事项
已经有4人回复
- 【求助/交流】荧光PCR扩增曲线问题
已经有18人回复
distant616
金虫 (小有名气)
- 应助: 18 (小学生)
- 金币: 1112.2
- 散金: 208
- 帖子: 112
- 在线: 63小时
- 虫号: 1112111
- 注册: 2010-10-01
- 专业: 环境工程
2楼2013-11-28 11:56:01
niil
金虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 35 (小学生)
- 金币: 6673.5
- 红花: 3
- 帖子: 835
- 在线: 233.2小时
- 虫号: 876426
- 注册: 2009-10-18
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-11-28 12:45:58
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+4, 鼓励交流 2013-11-28 12:45:58
|
从熔解曲线上看，引物质量挺好，稍微有一点二聚体，可以降低一点引物的使用量。 标准曲线做的很不好。你使用的标准样品浓度太高，Ct值都小于10。你的阈值设的有点高，阈值最好设置在产物刚刚快速增加的区间，要符合实时定量的数学模型. 做好一个标准曲线，标准样品的浓度需要好好的去做梯度稀释。使得各梯度的样品Ct值在15-28的区间比较好，你的标准样品太集中了，没有代表性。 最后获得的标准曲线的slope应该在-3.32左右，扩增效率才能达到100%。 |
3楼2013-11-28 12:25:55
4楼2013-11-28 15:15:30
5楼2015-06-03 14:30:06
