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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告

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huangyan0517

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[求助] SDS-PAGE出问题了，高手指教

溶液都是新配的，15%分离胶，5%浓缩胶，2倍loading buffer我自己配的。下图里，前两个用到是我用自己的buffer做的marker，就是检验一下buffer好不好，只有两种蛋白溶菌酶和BSA，后面是买的marker。在后是我的样品，现在问题是，我的loading buffer好像不怎么样，同时蛋白跑的距离太短，以前同样条件基本上跑到底了，现在才在中间。问题出在哪？

20131114002.jpg

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时间在哪里，成就就在哪里

1楼 2013-11-14 10:39:24

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爵士小孩

银虫 (小有名气)

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【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

我觉得应该先看看你的marker分子量大小，再来确定分离胶的浓度

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我就是我！

9楼2013-11-15 15:48:37

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huangyan0517

金虫 (小有名气)

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电压为80V，30min，120V，50min。高不高？

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时间在哪里，成就就在哪里

2楼2013-11-14 10:57:44

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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

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【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:24:24

胶不是很清晰，检查配胶缓冲液的pH，电泳缓冲液是不是对。如果蛋白的迁移率差很多，可能是丙烯酰胺母液中的丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺的比例不对。如果怀疑是loading buffer的问题，重新配置一下看看。

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3楼2013-11-14 13:31:23

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cicelyzh

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【答案】应助回帖

引用回帖:

2楼: Originally posted by huangyan0517 at 2013-11-14 10:57:44
电压为80V，30min，120V，50min。高不高？

小胶一般就这么跑的。你的电泳过程中电流是多少？

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4楼2013-11-14 13:32:15

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