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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE出问题了，高手指教
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huangyan0517

金虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE出问题了，高手指教

溶液都是新配的，15%分离胶，5%浓缩胶，2倍loading buffer我自己配的。下图里，前两个用到是我用自己的buffer做的marker，就是检验一下buffer好不好，只有两种蛋白溶菌酶和BSA，后面是买的marker。在后是我的样品，现在问题是，我的loading buffer好像不怎么样，同时蛋白跑的距离太短，以前同样条件基本上跑到底了，现在才在中间。问题出在哪？
SDS-PAGE出问题了，高手指教
20131114002.jpg
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时间在哪里，成就就在哪里
1楼 2013-11-14 10:39:24
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
试剂全部重配，问题解决，不知道当初哪个配错了
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时间在哪里，成就就在哪里
10楼2013-11-17 18:34:47
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huangyan0517

金虫 (小有名气)
电压为80V，30min，120V，50min。高不高？
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时间在哪里，成就就在哪里
2楼2013-11-14 10:57:44
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-14 23:24:24
胶不是很清晰，检查配胶缓冲液的pH，电泳缓冲液是不是对。如果蛋白的迁移率差很多，可能是丙烯酰胺母液中的丙烯酰胺：甲叉丙烯酰胺的比例不对。如果怀疑是loading buffer的问题，重新配置一下看看。
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3楼2013-11-14 13:31:23
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
2楼: Originally posted by huangyan0517 at 2013-11-14 10:57:44
电压为80V，30min，120V，50min。高不高？

小胶一般就这么跑的。你的电泳过程中电流是多少？
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4楼2013-11-14 13:32:15
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