应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 5774  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)

[求助] 共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题 已有1人参与

目前在做蛋白亚细胞定位，连的GFP，用的拟南芥原生质体转化，在共聚焦显微镜下观察。

如图中的观察结果，有些质粒看不到明显的GFP荧光，但是有一些与叶绿体背景相当，或者稍强于叶绿体背景的环状荧光信号。请问这些是转化的质粒的GFP信号吗。做了很多质粒，golgi、TGN等的信号都还不错，但至今没有得到质粒的液泡膜信号。有些质粒是已被验证过的液泡膜定位，但在我的实验中也没有观察到强的GFP信号，最多就是图片中的强度。请问，图片中的环状信号是背景，还是我的质粒的信号呢。
共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题
9-5.jpg


共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题-1
7-2.jpg


共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题-2
7-7-2.jpg


共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题-3
9-1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-11-12 12:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dfl204

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
叶绿体的自发荧光可以设置成其它的颜色。另外建议使用已知蛋白Marker-RFP进行共转。
赞一下 回复此楼
8楼2013-11-14 15:45:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
七八月的阳光: 金币+1, ★有帮助 2013-11-12 18:00:11
最好找更典型的照片，不过我感觉是在液泡上表达的，譬如9-1的右上角。另外，可以找一些液泡标记蛋白作个对照。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-11-12 17:33:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-11-12 17:33:39
最好找更典型的照片，不过我感觉是在液泡上表达的，譬如9-1的右上角。另外，可以找一些液泡标记蛋白作个对照。

如果就这样的荧光强度，能够和液泡膜的marker重叠，就能证明是定位在液泡膜吗？
我做的其他定位在golgi等的质粒，GFP荧光就特别强，完全可以忽略叶绿体的背景，不知道为什么做液泡膜的就得不到强的荧光？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-11-12 18:04:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-12 19:13:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by 七八月的阳光 at 2013-11-12 18:04:47
如果就这样的荧光强度，能够和液泡膜的marker重叠，就能证明是定位在液泡膜吗？
我做的其他定位在golgi等的质粒，GFP荧光就特别强，完全可以忽略叶绿体的背景，不知道为什么做液泡膜的就得不到强的荧光？...

一方面，和marker重叠，另一方面，最好找比较典型的细胞，譬如上面我提到的9-1，这样的结果基本上就可以说明问题了，如果条件允许，最好再做个western blot验证蛋白表达。荧光强度不强，如果排除实验步骤问题，这可能和你所标记的蛋白性质有关。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2013-11-12 18:41:17
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 305求调剂 +7 RuiFairyrui 2026-03-28 7/350 2026-03-29 00:40 by 544594351
[考研] 085600 材料与化工 329分求调剂 +10 Mr. Z 2026-03-25 10/500 2026-03-29 00:34 by 我是小康
[考研] 070300化学354求调剂 +3 101次希望 2026-03-28 3/150 2026-03-29 00:28 by 544594351
[考研] 一志愿华北电力大学能动专硕，293，求调剂 +3 15537177284 2026-03-23 5/250 2026-03-28 16:11 by xxxsssccc
[考研] 085602 307分 求调剂 +7 不知道叫什么！ 2026-03-26 7/350 2026-03-28 09:57 by 神马都不懂
[考研] 张芳铭-中国农业大学-环境工程专硕-298 +4 手机用户 2026-03-26 4/200 2026-03-28 07:17 by mmm just
[考研] 331环境科学与工程求调剂 +3 熠然好运气 2026-03-27 3/150 2026-03-28 04:11 by fmesaito
[考博] 26申博 +3 加油冲啊！ 2026-03-26 3/150 2026-03-27 15:38 by cls512
[考研] 0856调剂 +5 求求让我有书读� 2026-03-26 6/300 2026-03-27 15:12 by caszguilin
[考研] 一志愿华东理工大学081700，初试分数271 +6 kotoko_ik 2026-03-23 7/350 2026-03-27 12:29 by 惠州彭于晏
[考研] 298调剂 +3 jiyingjie123 2026-03-27 3/150 2026-03-27 11:57 by wxiongid
[考研] 求调剂 +3 刘柯@ 2026-03-24 4/200 2026-03-27 11:28 by shangxh
[考研] 考研调剂 +9 小蜡新笔 2026-03-26 9/450 2026-03-27 11:10 by 不吃魚的貓
[考研] 281求调剂 +3 亚克西good 2026-03-26 5/250 2026-03-26 19:48 by 不吃魚的貓
[考研] 302求调剂 +4 锦衣卫藤椒 2026-03-25 4/200 2026-03-25 16:29 by 功夫疯狂
[考研] 285求调剂 +3 AZMK 2026-03-24 3/150 2026-03-25 12:23 by userper
[考研] 340求调剂 +5 话梅糖111 2026-03-24 5/250 2026-03-25 06:53 by ilovexiaobin
[考研] 求调剂 +6 研研，接电话 2026-03-24 7/350 2026-03-24 17:01 by barlinike
[考研] 求调剂一志愿武汉理工大学材料工程（085601） +5 WW.' 2026-03-23 7/350 2026-03-24 14:50 by sprinining
[考研] 335求调剂 +4 yuyu宇 2026-03-23 5/250 2026-03-23 23:49 by Txy@872106
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭