应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题
51/1返回列表
查看: 5546  |  回复: 8
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)

[求助] 共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题已有1人参与

目前在做蛋白亚细胞定位，连的GFP，用的拟南芥原生质体转化，在共聚焦显微镜下观察。

如图中的观察结果，有些质粒看不到明显的GFP荧光，但是有一些与叶绿体背景相当，或者稍强于叶绿体背景的环状荧光信号。请问这些是转化的质粒的GFP信号吗。做了很多质粒，golgi、TGN等的信号都还不错，但至今没有得到质粒的液泡膜信号。有些质粒是已被验证过的液泡膜定位，但在我的实验中也没有观察到强的GFP信号，最多就是图片中的强度。请问，图片中的环状信号是背景，还是我的质粒的信号呢。
共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题
9-5.jpg


共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题-1
7-2.jpg


共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题-2
7-7-2.jpg


共聚焦显微镜-GFP液泡膜定位问题-3
9-1.jpg
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼2013-11-12 12:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by starseacow at 2013-11-12 17:33:39
最好找更典型的照片，不过我感觉是在液泡上表达的，譬如9-1的右上角。另外，可以找一些液泡标记蛋白作个对照。

如果就这样的荧光强度，能够和液泡膜的marker重叠，就能证明是定位在液泡膜吗？
我做的其他定位在golgi等的质粒，GFP荧光就特别强，完全可以忽略叶绿体的背景，不知道为什么做液泡膜的就得不到强的荧光？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2013-11-12 18:04:47
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答

starseacow

专家顾问 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
七八月的阳光: 金币+1, ★有帮助 2013-11-12 18:00:11
最好找更典型的照片，不过我感觉是在液泡上表达的，譬如9-1的右上角。另外，可以找一些液泡标记蛋白作个对照。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
2楼2013-11-12 17:33:39
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

starseacow

专家顾问 (职业作家)
★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-11-12 19:13:47
引用回帖:
3楼: Originally posted by 七八月的阳光 at 2013-11-12 18:04:47
如果就这样的荧光强度，能够和液泡膜的marker重叠，就能证明是定位在液泡膜吗？
我做的其他定位在golgi等的质粒，GFP荧光就特别强，完全可以忽略叶绿体的背景，不知道为什么做液泡膜的就得不到强的荧光？...

一方面，和marker重叠，另一方面，最好找比较典型的细胞，譬如上面我提到的9-1，这样的结果基本上就可以说明问题了，如果条件允许，最好再做个western blot验证蛋白表达。荧光强度不强，如果排除实验步骤问题，这可能和你所标记的蛋白性质有关。
赞一下 回复此楼
植物生理群69993869，为避免广告，申请加入请提供木虫昵称，院校及专业信息
4楼2013-11-12 18:41:17
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

七八月的阳光

铜虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by starseacow at 2013-11-12 18:41:17
一方面，和marker重叠，另一方面，最好找比较典型的细胞，譬如上面我提到的9-1，这样的结果基本上就可以说明问题了，如果条件允许，最好再做个western blot验证蛋白表达。荧光强度不强，如果排除实验步骤问题，这可 ...

western是用转化后的原生质体来做吗
赞一下 回复此楼
5楼2013-11-13 10:15:50
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 9 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭