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kehan777

木虫 (小有名气)

[求助] PCR产物凝胶电泳图

请问大家对这个图的PCR反应体系有什么建议吗?
拖带、有二聚体、目的条带不够亮..

其中一条:是该稍微减少模板量,还是增加?
PCR产物凝胶电泳图
3.png
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wuyao0513

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-10-30 21:00:46
换引物吧,引物的影响很大的。。。好好的设计
3楼2013-10-30 11:38:52
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yesucao

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-10-30 21:00:35
kehan777: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-11-05 19:24:32
模板提取是不是不是很好啊?浓度低了,增加模板量试一下,反正到时候你切的是你的目的条带。
2楼2013-10-30 11:32:23
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wanghx_2012

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-10-30 21:00:55
首先,你是菌落PCR还是提取的DNA。
如果是DNA,建议纯化后再PCR,如果还是不行就从新设计引物;如果是菌落PCR,建议用菌龄早的小菌落,添加适量的镁离子,再做一次,如果不行就换引物。
4楼2013-10-30 15:26:57
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hjyxm

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流! 2013-10-31 13:09:11
可以尝试提高TM值,还有就是模板量太少,由图可见你的目的条带在500bp左右,用2%的琼脂糖胶试一试,电压低一点!
好好工作!
5楼2013-10-31 09:45:59
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