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球球爱跳

铁虫 (小有名气)

[求助] 关于pcr产物的聚丙烯凝胶电泳

我现在在做多重pcr产物的聚丙烯凝胶电泳,找到的配方:试剂       
        12%       
30%丙烯酰胺溶液(ml)16.6       
水(ml)                40       
5×TBE(ml)        20
10%过硫酸铵(ml)        0.7
TEMED(ml)        0.035
1配制需要10ml左右是不是可以等量减少啊?
2据说跑胶之前产物要变性成单链对吗?
3跑胶的那个marker 是不是就不能用跑琼脂糖电泳时用的marker了
请大师们指点一下吧,
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
球球爱跳(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-05-16 17:01:44
球球爱跳: 金币+10, 有帮助, 谢谢 2013-05-16 19:02:58
楼主,从你的问题中,就能看出你很少做聚丙烯凝胶电泳!我猜的对吧?
聚丙烯酰胺凝胶可以精确到各位数碱基的DNA电泳!一般琼脂糖分离不出来,我们才选择聚丙烯酰胺凝胶····
1. 你的配方是可以等量递增或递减的!只要他的比例没有变化就行!

2. 样品的处理与不处理!关键看你跑的是单链的还是双链的?单链的就要处理,双链的就不用处理了!一般跑DNA的聚丙烯酰胺凝胶不用加热处理!

3.应该是不能用的,聚丙烯酰胺凝胶和琼脂糖凝胶在DNA分离方面分离范围是不同的!所以选择合适的Marker是关键!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
2楼2013-05-16 13:05:57
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球球爱跳

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-05-16 13:05:57
楼主,从你的问题中,就能看出你很少做聚丙烯凝胶电泳!我猜的对吧?
聚丙烯酰胺凝胶可以精确到各位数碱基的DNA电泳!一般琼脂糖分离不出来,我们才选择聚丙烯酰胺凝胶····
1. 你的配方是可以等量递增或递减的 ...

谢谢你 我就做了一次,做的很不好,查资料查的头晕忽忽的
3楼2013-05-16 19:03:36
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 球球爱跳 at 2013-05-16 19:03:36
谢谢你 我就做了一次,做的很不好,查资料查的头晕忽忽的...

实验是慢慢来的东西!并不是所有人都能一次成功!相信自己!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
4楼2013-05-16 19:06:57
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