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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » BL21(DE3)表达目的蛋白不稳定
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ludovic0909

新虫 (初入文坛)

[求助] BL21(DE3)表达目的蛋白不稳定

我最近做一个抗体功能片段的可溶性表达（至周质）。重组质粒构建都没有问题，测序也对，但是经过诱导之后，周质中的目的肽链经常没有，做三次重复有一次能在周质中表达出来。
所以我想请问下大家有没有类似经历，是否是因为宿主菌BL21（DE3）不稳定？
多谢！
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1楼 2013-10-24 11:15:00
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solopen

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

BL21（DE3）是构建比较好的一个宿主菌，不应该表达时有时无。我曾做过
1）诱导温度一定要低
2）诱导浓度也要摸索（包括IPTG和菌体浓度）
3）诱导的时间也要摸索
还有就是我当初构建了一系列（长短及个别碱基不同）的序列，多数都能可溶表达，但有的不能正确折叠，形成了包涵体
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5楼2013-11-15 11:01:31
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huangsz997

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助！ 2013-10-24 23:29:29
在网上很容易搜到原核表达手册，那上面解释的还算全面 换个宿主菌试一下……
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2楼2013-10-24 22:40:16
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-字仲康

禁虫 (正式写手)
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3楼2013-11-14 22:18:03
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doudoushan

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议换宿主菌，优化一下表达条件，比如低温、IPTG浓度等
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4楼2013-11-15 02:45:01
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