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ludovic0909

新虫 (初入文坛)

[求助] BL21(DE3)表达目的蛋白不稳定

我最近做一个抗体功能片段的可溶性表达(至周质)。重组质粒构建都没有问题,测序也对,但是经过诱导之后,周质中的目的肽链经常没有,做三次重复有一次能在周质中表达出来。
所以我想请问下大家有没有类似经历,是否是因为宿主菌BL21(DE3)不稳定?
多谢!
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-字仲康

禁虫 (正式写手)

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3楼2013-11-14 22:18:03
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huangsz997

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-10-24 23:29:29
在网上很容易搜到原核表达手册,那上面解释的还算全面 换个宿主菌试一下……
2楼2013-10-24 22:40:16
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doudoushan

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议换宿主菌,优化一下表达条件,比如低温、IPTG浓度等
4楼2013-11-15 02:45:01
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solopen

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

BL21(DE3)是构建比较好的一个宿主菌,不应该表达时有时无。我曾做过
1)诱导温度一定要低
2)诱导浓度也要摸索(包括IPTG和菌体浓度)
3)诱导的时间也要摸索
还有就是我当初构建了一系列(长短及个别碱基不同)的序列,多数都能可溶表达,但有的不能正确折叠,形成了包涵体
5楼2013-11-15 11:01:31
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