24小时热门版块排行榜    

查看: 1375  |  回复: 4
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

ludovic0909

新虫 (初入文坛)

[求助] BL21(DE3)表达目的蛋白不稳定

我最近做一个抗体功能片段的可溶性表达(至周质)。重组质粒构建都没有问题,测序也对,但是经过诱导之后,周质中的目的肽链经常没有,做三次重复有一次能在周质中表达出来。
所以我想请问下大家有没有类似经历,是否是因为宿主菌BL21(DE3)不稳定?
多谢!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

doudoushan

木虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

建议换宿主菌,优化一下表达条件,比如低温、IPTG浓度等
4楼2013-11-15 02:45:01
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 5 个回答

huangsz997

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
laozuzunzhe: 金币+1, 鼓励应助! 2013-10-24 23:29:29
在网上很容易搜到原核表达手册,那上面解释的还算全面 换个宿主菌试一下……
2楼2013-10-24 22:40:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

-字仲康

禁虫 (正式写手)

本帖内容被屏蔽

3楼2013-11-14 22:18:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

solopen

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

BL21(DE3)是构建比较好的一个宿主菌,不应该表达时有时无。我曾做过
1)诱导温度一定要低
2)诱导浓度也要摸索(包括IPTG和菌体浓度)
3)诱导的时间也要摸索
还有就是我当初构建了一系列(长短及个别碱基不同)的序列,多数都能可溶表达,但有的不能正确折叠,形成了包涵体
5楼2013-11-15 11:01:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的,真有人买论文么?感觉没必要啊 +9 Tide man 2026-08-10 10/500 2026-08-13 20:33 by 温淼淼淼
[文学芳草园] 阿姨 +4 汪汪锅 2026-08-09 4/200 2026-08-13 19:43 by arzu_hma
[硕博家园] 一作与独作在应聘高校教师时区别大吗 +3 mbygzh 2026-08-08 4/200 2026-08-13 19:31 by 龙-樱
[基金申请] FileCode能看出啥? +10 要乐观耀哥 2026-08-10 28/1400 2026-08-13 17:51 by 医学老男孩
[基金申请] filecode +14 documentary 2026-08-10 16/800 2026-08-13 16:39 by 润生71
[基金申请] 重要来源:本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] 分享一下我之前已中青C的计划书的filecode +4 布布和一二 2026-08-11 5/250 2026-08-13 12:56 by cratir
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 综述论文作为代表作会不会影响评审专家的印象分? +11 yufeiwaner 2026-08-09 13/650 2026-08-12 08:17 by yufeiwaner
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 为什么网上很多人说本周 12号出结果 +6 瞬息宇宙 2026-08-10 7/350 2026-08-11 19:25 by Tide man
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
信息提示
请填处理意见