应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » overlap PCR
61/1返回列表
查看: 797  |  回复: 5
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

LWL8798

新虫 (初入文坛)

[求助] overlap PCR

我最近在做overlap PCR，前后两段都已经P出来了，现在做连接，用了touchdown，温度从65℃降到45℃，但是依然没有条带，真不知道是什么出来问题，如果异物有问题，那前后两段也不能P出来吧！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-10-21 16:14:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

niil

金虫 (正式写手)
有详细的实验步骤么？
赞一下 回复此楼
Stop fighting,let it flow.
2楼2013-10-21 16:25:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dkyy970111

铁杆木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-10-21 17:58:16
重叠区多长？退火应该是逐渐增高的，试下45度，5 cycles，再65度 25cycles
赞一下 回复此楼
打铁还要自身硬
3楼2013-10-21 16:40:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LWL8798

新虫 (初入文坛)
我是因为我想要的那段有个突变，想改过来，所以用了这个，直接设计了两个完全互补的引物，重叠区有31个碱基，PCR的程序是98℃变性5min，98℃30s，65℃-45℃touchdown，然后72℃2min，后用50℃的退火温度，40个循环都没有条带。
赞一下 回复此楼
4楼2013-10-21 16:51:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

LWL8798

新虫 (初入文坛)
我把最初的两条带重新P了一下，现在有结果了。
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2013-10-21 20:49:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
gyesang: 金币+2, 鼓励交流！ 2013-10-29 18:28:31
序列重复片段长多多少？我之前也做过，融合不上的时候可以换换酶，也可以用touchdown的方法
赞一下(1人) 回复此楼
坚持不懈,终会成功!
6楼2013-10-22 16:56:19
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 LWL8798 的主题更新
61/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭