| 查看: 4874 | 回复: 14 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
1989zb金虫 (小有名气)
|
[求助]
怎么做融合蛋白？
|
|
|
现在准备做一个融合蛋白，有两种方法不知道该用哪种好呢？ 第一种：通过去掉第一个蛋白的终止子，用linker连接第二个蛋白，不知道怎么选择linker? 第二种：通过融合PCR 扩增出两个蛋白的基因全长 ，第一个蛋白的基因序列也去掉终止子， 请问这两种方法哪种更好点呢？？？ 还有就是怎么设计linker呢？ |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有124人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白前面有一个his-tag和sumo-tag,想去掉sumo-tag，只留下一个his-tag，该怎么做
已经有5人回复
- 怎样能得到高纯度的蛋白？
已经有10人回复
- 我的蛋白在大肠杆菌中表达量低怎么办？
已经有7人回复
- 蛋白表达不出来是怎么回事？
已经有12人回复
- 如何设计引物扩增片段？做克隆的
已经有11人回复
- 求助！关于GST融合蛋白纯化！楼主愁得一夜没有睡好！
已经有20人回复
- His Tag融合蛋白纯化
已经有8人回复
- 做GST纯化beads离心转速高了？怎么办？
已经有4人回复
- gst标签蛋白的表达和纯化
已经有17人回复
- 融合蛋白的linker怎么设计
已经有14人回复
- 蛋白互作必会，GST纯化遇到的问题
已经有13人回复
- 高等电点（pI8.3）his融合蛋白纯化，选用何种缓冲液？
已经有7人回复
- 融合蛋白不挂柱，急！
已经有7人回复
- 进行羟胺裂解后，进行蛋白的二次过亲和层析住纯化问题！！！！求助啊 ！！！
已经有9人回复
- 最近纯化融合蛋白，请问透析需要加PMSF吗？
已经有16人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 毕赤酵母怎么表达不出融合蛋白？
已经有14人回复
- 【求助/交流】做蛋白融合，怎样设计连接肽（linker）？
已经有6人回复
- 【求助/交流】如何降低，多克隆抗体非特异性？
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于GFP融合的蛋白的一些问题
已经有7人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化后可不可以不除咪唑直接送公司做抗体
已经有4人回复
- 【求助/交流】MBP融合蛋白活性低？
已经有10人回复
1989zb
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1734.4
- 帖子: 268
- 在线: 177.3小时
- 虫号: 1387794
- 注册: 2011-09-02
- 性别: GG
- 专业: 兽医免疫学
4楼2013-10-13 09:36:40
fuyuandj86
版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
- 应助: 397 (硕士)
- 贵宾: 0.015
- 金币: 7575.7
- 散金: 493
- 红花: 60
- 沙发: 2
- 帖子: 1312
- 在线: 1386.9小时
- 虫号: 544795
- 注册: 2008-04-13
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
- 管辖: 生物科学
2楼2013-10-12 23:25:36
xiaozhu20131
新虫 (小有名气)
- 应助: 6 (幼儿园)
- 金币: 593.7
- 红花: 1
- 帖子: 188
- 在线: 17.8小时
- 虫号: 2626126
- 注册: 2013-08-31
- 专业: 人类遗传学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-13 09:36:51
感谢参与，应助指数 +1
1989zb: 金币+10, ★★★很有帮助 2013-10-13 09:36:51
|
构建融合蛋白的基本原则是， 将第一个蛋白的终止密码子删除，再接上带有终止密码子的第二个蛋白基因，以实现两个基因的共同表达。具体步骤有： 1.进行目的基因的克隆：根据基因序列互补原则 ，设计合适的引物序列，以cDNA为模板，利用PCR技术扩增不同的目的DNA片段。 2.在载体中进行重组：通过限制内切酶将两个DNA片段进行酶切并回收，然后通过连接酶将两个具有相同末端酶切位点的基因片段进行体外连接，并克隆到高表达质粒载体中，构建重组质粒。 3.将重组表达载体转染宿主细胞并利用选择标志进行筛选及测序。 4.融合基因的诱导表达及表达蛋白的纯化 。 |
3楼2013-10-13 07:46:23
1989zb
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1734.4
- 帖子: 268
- 在线: 177.3小时
- 虫号: 1387794
- 注册: 2011-09-02
- 性别: GG
- 专业: 兽医免疫学
5楼2013-10-13 09:37:32
5