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月亮先生

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[交流] 产物相近,是不是要对内参换引物了。

最近要做半定量PCR,想摸索内参和目的基因在同一个pcr管中一起扩增的情况。
如图“2013-9-16 ”,所上样的处理分别为。基因P三个泳道,基因GAPDH三个泳道,基因C三个泳道(其中基因GAPDH是内参基因),Marker三个泳道,基因P和G放在相同PCR管中一起扩增三个泳道(用P'G'表示),基因C和基因G一起放在相同PCR管中一起扩增三个泳道(用C'G'表示)。

用BIORAD的仪器读出的核酸含量情况如图“含量结果”,P基因的产物长度为158bp,G基因的长度为167bp,C基因的产物长度193bp。P基因和G基因一起扩条带不能分开。但P基因和G基因单独扩增的产物的产量和P基因G基因一起扩增的结果是相近的。这是不是说明P基因和G基因的引物并未发生相互抑制的情况。为了让P基因G基因的产物分开。我是不是应该果断换内参的引物了,让这二者的产物bp数相差大一点。
产物相近,是不是要对内参换引物了。
2013-09-16.JPG


产物相近,是不是要对内参换引物了。-1
含量结果.jpg
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