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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 求助能将蛋白从酶解反应后的体系中再次纯化出来的方法
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 求助能将蛋白从酶解反应后的体系中再次纯化出来的方法

现在做一个75kDa的蛋白降解活性实验，发现在将靶DNA降解后蛋白质本身似乎会自动获取一段DNA降解产物，想测序看看和蛋白质结合的靶DNA序列到底是哪一段，但是不知道如何先将蛋白质和其他游离的DNA片段分离，请问有什么方法或者试剂盒能做到么？
这个蛋白带有5'端strepII-tag，反应buffer和纯化buffer略有差别（前者0.2M NaCl，后者0.5M NaCl并含有desthiobiotin）。不知道能不能重新用亲和层析柱纯化一下？

谢了先！
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1楼 2013-08-17 18:33:23
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
aaa0001984: 金币+5, ★有帮助, 谢谢你的帮助，我查一下相关文献并问一下隔壁实验室做芯片的师姐，如果有帮助的话再给您加金币，谢谢！ 2013-08-17 21:24:49
aaa0001984: 金币+15, ★★★很有帮助, very useful information 2013-08-18 05:15:41
参照Chip方法，将蛋白DNA结合后，利用Taq挂柱洗脱，然后把DNA纯化，测序。
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Let'sdoit.
2楼2013-08-17 21:08:46
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-17 21:08:46
参照Chip方法，将蛋白DNA结合后，利用Taq挂柱洗脱，然后把DNA纯化，测序。

谢谢您的回复，请问您有相关的protocol么？还有您说的chip是什么样的芯片呢？请多指教，谢了先！
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3楼2013-08-17 21:25:54
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yimingwang

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by aaa0001984 at 2013-08-17 14:25:54
谢谢您的回复，请问您有相关的protocol么？还有您说的chip是什么样的芯片呢？请多指教，谢了先！...

我说的Chip指Chromatin Immunoprecipitation,是做protein-chromatin interaction时候用的。应该适用于你的试验。这是网上可以找到的protocol。你可以打开看看，然后根据你的情况进行改进。
http://farnham.genomecenter.ucda ... ChIP%20Protocol.pdf
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aaa0001984
Let'sdoit.
4楼2013-08-18 00:36:37
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-18 00:36:37
我说的Chip指Chromatin Immunoprecipitation,是做protein-chromatin interaction时候用的。应该适用于你的试验。这是网上可以找到的protocol。你可以打开看看，然后根据你的情况进行改进。
http://farnham.genome ...

thanks very much!
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5楼2013-08-18 05:15:07
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