24小时热门版块排行榜    

查看: 656  |  回复: 4

aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 求助能将蛋白从酶解反应后的体系中再次纯化出来的方法

现在做一个75kDa的蛋白降解活性实验,发现在将靶DNA降解后蛋白质本身似乎会自动获取一段DNA降解产物,想测序看看和蛋白质结合的靶DNA序列到底是哪一段,但是不知道如何先将蛋白质和其他游离的DNA片段分离,请问有什么方法或者试剂盒能做到么?
这个蛋白带有5'端strepII-tag,反应buffer和纯化buffer略有差别(前者0.2M NaCl,后者0.5M NaCl并含有desthiobiotin)。不知道能不能重新用亲和层析柱纯化一下?

谢了先!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aaa0001984: 金币+5, 有帮助, 谢谢你的帮助,我查一下相关文献并问一下隔壁实验室做芯片的师姐,如果有帮助的话再给您加金币,谢谢! 2013-08-17 21:24:49
aaa0001984: 金币+15, ★★★很有帮助, very useful information 2013-08-18 05:15:41
参照Chip方法,将蛋白DNA结合后,利用Taq挂柱洗脱,然后把DNA纯化,测序。
Let'sdoit.
2楼2013-08-17 21:08:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-17 21:08:46
参照Chip方法,将蛋白DNA结合后,利用Taq挂柱洗脱,然后把DNA纯化,测序。

谢谢您的回复,请问您有相关的protocol么?还有您说的chip是什么样的芯片呢?请多指教,谢了先!
3楼2013-08-17 21:25:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yimingwang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aaa0001984 at 2013-08-17 14:25:54
谢谢您的回复,请问您有相关的protocol么?还有您说的chip是什么样的芯片呢?请多指教,谢了先!...

我说的Chip指Chromatin Immunoprecipitation,是做protein-chromatin interaction时候用的。应该适用于你的试验。这是网上可以找到的protocol。你可以打开看看,然后根据你的情况进行改进。
http://farnham.genomecenter.ucda ... ChIP%20Protocol.pdf

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Let'sdoit.
4楼2013-08-18 00:36:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-18 00:36:37
我说的Chip指Chromatin Immunoprecipitation,是做protein-chromatin interaction时候用的。应该适用于你的试验。这是网上可以找到的protocol。你可以打开看看,然后根据你的情况进行改进。
http://farnham.genome ...

thanks very much!
5楼2013-08-18 05:15:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 aaa0001984 的主题更新
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] NSFC申报书里申请人简历中代表性论著还需要在申报书最后的附件里面再上传一遍吗 20+5 NSFC2026我来了 2026-03-10 14/700 2026-03-15 23:53 by 不负韶华的虎
[考研] 326求调剂 +3 上岸的小葡 2026-03-15 4/200 2026-03-15 18:50 by 无际的草原
[考研] 311求调剂 +5 冬十三 2026-03-15 5/250 2026-03-15 18:38 by 无际的草原
[考研] 一志愿985,本科211,0817化学工程与技术319求调剂 +3 Liwangman 2026-03-15 3/150 2026-03-15 18:16 by JourneyLucky
[考研] 0703化学调剂,求各位老师收留 +7 秋有木北 2026-03-14 7/350 2026-03-15 17:30 by 小物理化学
[考研] 070305求调剂 +3 mlpqaz03 2026-03-14 4/200 2026-03-15 11:04 by peike
[考研] 283求调剂 +6 小楼。 2026-03-12 9/450 2026-03-14 22:15 by cfxczx2015
[考研] 289求调剂 +4 这么名字咋样 2026-03-14 6/300 2026-03-14 18:58 by userper
[考研] 复试调剂 +9 Copy267 2026-03-10 9/450 2026-03-13 23:45 by userper
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
[考研] 材料专硕350 求调剂 +4 王金科 2026-03-12 4/200 2026-03-13 16:02 by ruiyingmiao
[考研] 工科278分求调剂 +5 周慢热啊 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:49 by JourneyLucky
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-12 5/250 2026-03-13 10:56 by houyaoxu
[考研] 08食品或轻工求调剂,本科发表3篇sci一区top论文,一志愿南师大食品科学与工程 +3 我是一个兵, 2026-03-10 3/150 2026-03-13 10:21 by Yuyi.
[考博] 读博申请 +5 感dd 2026-03-10 7/350 2026-03-11 17:02 by QGZDSYS
[考研] 083000环境科学与工程调剂 +8 mingmingry 2026-03-09 9/450 2026-03-11 10:23 by 沙漠之狐994
[考研] 家人们 调剂不迷路 看这里 +8 likeihood 2026-03-09 13/650 2026-03-10 08:09 by likeihood
[考研] 数二英二309分请求调剂 +3 dtdxzxx 2026-03-09 4/200 2026-03-09 19:56 by yuningshan
信息提示
请填处理意见