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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

[求助] 求助能将蛋白从酶解反应后的体系中再次纯化出来的方法

现在做一个75kDa的蛋白降解活性实验,发现在将靶DNA降解后蛋白质本身似乎会自动获取一段DNA降解产物,想测序看看和蛋白质结合的靶DNA序列到底是哪一段,但是不知道如何先将蛋白质和其他游离的DNA片段分离,请问有什么方法或者试剂盒能做到么?
这个蛋白带有5'端strepII-tag,反应buffer和纯化buffer略有差别(前者0.2M NaCl,后者0.5M NaCl并含有desthiobiotin)。不知道能不能重新用亲和层析柱纯化一下?

谢了先!
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yimingwang

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
aaa0001984: 金币+5, 有帮助, 谢谢你的帮助,我查一下相关文献并问一下隔壁实验室做芯片的师姐,如果有帮助的话再给您加金币,谢谢! 2013-08-17 21:24:49
aaa0001984: 金币+15, ★★★很有帮助, very useful information 2013-08-18 05:15:41
参照Chip方法,将蛋白DNA结合后,利用Taq挂柱洗脱,然后把DNA纯化,测序。
Let'sdoit.
2楼2013-08-17 21:08:46
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

引用回帖:
2楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-17 21:08:46
参照Chip方法,将蛋白DNA结合后,利用Taq挂柱洗脱,然后把DNA纯化,测序。

谢谢您的回复,请问您有相关的protocol么?还有您说的chip是什么样的芯片呢?请多指教,谢了先!
3楼2013-08-17 21:25:54
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yimingwang

金虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by aaa0001984 at 2013-08-17 14:25:54
谢谢您的回复,请问您有相关的protocol么?还有您说的chip是什么样的芯片呢?请多指教,谢了先!...

我说的Chip指Chromatin Immunoprecipitation,是做protein-chromatin interaction时候用的。应该适用于你的试验。这是网上可以找到的protocol。你可以打开看看,然后根据你的情况进行改进。
http://farnham.genomecenter.ucda ... ChIP%20Protocol.pdf

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Let'sdoit.
4楼2013-08-18 00:36:37
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aaa0001984

至尊木虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by yimingwang at 2013-08-18 00:36:37
我说的Chip指Chromatin Immunoprecipitation,是做protein-chromatin interaction时候用的。应该适用于你的试验。这是网上可以找到的protocol。你可以打开看看,然后根据你的情况进行改进。
http://farnham.genome ...

thanks very much!
5楼2013-08-18 05:15:07
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