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fuyuandj86版主 (著名写手)
己所不欲，勿施于人
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[求助]
PCR引物设计Tm
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| 请问PCR引物温度如果高于extension temperature(就是72度那一步)会不会有很大影响? 我的引物GC含量太高了,但是序列又不能随便改,要么引物会很短,要么Tm高于72度,不知道会不会有影响. |
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15879003030
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2楼2013-08-16 10:44:17
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引物GC含量太高，TM高一点PCR一般 没有问题，TM高与72度也可以，extension temperature这步主要是考虑Taq聚合酶的承受能力和酶活力，温度高些高与72度，Taq效率不是最高，稳定性可能也不是最为稳定，不过Taq能耐94度，应该问题不大。 引物GC含量太高适当地提高变性温度，一般是90-92度，楼主可以提高94度。 |
3楼2013-08-16 11:50:11
