| 查看: 1813 | 回复: 6 | ||
mayibuku木虫 (小有名气)
|
[求助]
PCR引物设计求助
|
|
各位版友，最近在做一个PCR的primer设计，模板大概500bp左右，GC含量47%，位于一个环形质粒上面，这些都很正常。但是麻烦的地方在于，我的s primer 需要一个6bp酶切位点以及相应保护碱基之类的，长度大概是30左右，但是我的anti primer需要在C端加上三个蛋白，也就是9bp，然后还有6bp的酶切位点，这样全部加起来长度达到了45bp，这样两个primer的长度相差很大，TM相差也很大，而且anti primer已经超过了38bp，也就是延伸温度可能会超过74度，这样退火延伸温度都不太好选择 这个PCR产物我是准备用来做TA克隆的，因此保护碱基数目已经设计得尽可能少了，但是还是很长，这种情况应该怎么优化呢? |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有225人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 分子新手，诚心向各位朋友求教PCR引物设计，谢谢！
已经有3人回复
- 【求助/交流】引物设计信息如此，touchdownPCR如何设计？
已经有7人回复
- 【求助/交流】引物设计的 序列选择问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】PCR求助，做不出来找不到原因
已经有16人回复
- 【求助/交流】pCR引物设计的详细规则
已经有7人回复
- 【求助/交流】多重PCR引物设计
已经有14人回复
- 【求助/交流】引物设计。金币可追加
已经有4人回复
- 【求助/交流】PCR引物设计出来了，但酶切之后电泳没条带啊
已经有18人回复
- 【求助/交流】请教各位一个定量PCR引物设计的问题，谢谢啦
已经有3人回复
- 引物设计求助~
已经有13人回复
★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
mayibuku: 金币+3, ★有帮助, 退火温度不用考虑加上的吗？可是第二轮开始就是整个primer和模板结合了啊 2012-07-16 21:55:48
感谢参与，应助指数 +1
mayibuku: 金币+3, ★有帮助, 退火温度不用考虑加上的吗？可是第二轮开始就是整个primer和模板结合了啊 2012-07-16 21:55:48
|
本帖内容被屏蔽 |
2楼2012-07-16 17:28:47
piaoyunokok
木虫 (正式写手)
- 应助: 25 (小学生)
- 金币: 3171.1
- 散金: 10
- 红花: 2
- 帖子: 704
- 在线: 116.6小时
- 虫号: 880952
- 注册: 2009-10-22
- 专业: 检验医学
3楼2012-07-16 18:15:09
reallpf
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 6
- 应助: 150 (高中生)
- 金币: 3388.3
- 散金: 2
- 红花: 12
- 帖子: 342
- 在线: 72.6小时
- 虫号: 1892494
- 注册: 2012-07-14
- 性别: GG
- 专业: 微生物生理与生物化学
4楼2012-07-16 19:01:29
|
本帖内容被屏蔽 |
5楼2012-07-17 10:46:56
123n
木虫 (正式写手)
- 应助: 17 (小学生)
- 金币: 4087.2
- 散金: 525
- 红花: 4
- 帖子: 536
- 在线: 120小时
- 虫号: 1432962
- 注册: 2011-10-09
- 性别: GG
- 专业: 肿瘤免疫
6楼2012-07-18 10:31:58
7楼2012-07-18 13:03:06
10