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yanglu12315

铁虫 (初入文坛)

[求助] 植物蛋白提取及双向电泳

想通过双向电泳找出差异表达蛋白,但因为第一次做,很多问题不懂,想得到师兄师姐指教:
因为需要自己提取果实中的蛋白,老板说可以先通过SDS-PAGE检测提取的蛋白效果,具体的是通过饱和酚提取的,请问最终干燥得到的蛋白干粉可溶于水吗?就是直接水溶蛋白后再加入loading buffer上样可以吗
如果可以水溶蛋白干粉,为什么双向电泳中要用到含有硫脲,尿素等的裂解液呢?如果不溶于水,那不是和我们已有理论蛋白溶于水不符合吗,如果这样那跑SDS-PAGE检测蛋白提取效果时是不是也应该先用裂解液溶解呢

初次做摸条件中望得到指教,不甚感激~~~
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
yanglu12315: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-13 16:43:11
总蛋白一般是溶在缓冲液里。直接用水会使蛋白的稳定性差,有些膜蛋白在水中的溶解度低。一般的蛋白干粉溶于水,如果膜蛋白浓度高的话水溶性差。跑SDS-PAGE的蛋白样品需要用loading buffer变性。
做双向电泳的水化液是为了变性蛋白,但不能使用如SDS这样的离子去垢剂,否则会破坏蛋白所带电荷。SDS-PAGE的样品不需要用双向电泳的水化液变性。因为你跑SDS-PAGE需要让所有蛋白的表面结合SDS。
2楼2013-08-13 13:06:45
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yanglu12315

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-13 13:06:45
总蛋白一般是溶在缓冲液里。直接用水会使蛋白的稳定性差,有些膜蛋白在水中的溶解度低。一般的蛋白干粉溶于水,如果膜蛋白浓度高的话水溶性差。跑SDS-PAGE的蛋白样品需要用loading buffer变性。
做双向电泳的水化液 ...

明白了,谢谢
3楼2013-08-13 16:43:31
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wuxiao549

禁虫 (著名写手)

本帖内容被屏蔽

4楼2013-08-13 16:49:43
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yanglu12315

铁虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by wuxiao549 at 2013-08-13 16:49:43
善意提醒一下,双向电泳里面道道很多,不是随便就做一下的。。楼主要多看看资料

谢谢3楼,我这双向完全没做过呢,现在只是初期想用SDS-PAGE摸索下提取条件,话说你有木有什么资料可供我这初手学习学习呢,可以发我邮箱yanglu12315@sina.com,不甚感激啦
5楼2013-08-13 23:21:32
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奋斗中的喵喵

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-13 13:06:45
总蛋白一般是溶在缓冲液里。直接用水会使蛋白的稳定性差,有些膜蛋白在水中的溶解度低。一般的蛋白干粉溶于水,如果膜蛋白浓度高的话水溶性差。跑SDS-PAGE的蛋白样品需要用loading buffer变性。
做双向电泳的水化液 ...

跑SDS的话需要加蛋白裂解液么?

发自小木虫Android客户端
6楼2018-01-02 20:58:59
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