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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 综合其他 » 植物蛋白提取及双向电泳
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yanglu12315

铁虫 (初入文坛)

[求助] 植物蛋白提取及双向电泳

想通过双向电泳找出差异表达蛋白，但因为第一次做，很多问题不懂，想得到师兄师姐指教：
因为需要自己提取果实中的蛋白，老板说可以先通过SDS-PAGE检测提取的蛋白效果，具体的是通过饱和酚提取的，请问最终干燥得到的蛋白干粉可溶于水吗？就是直接水溶蛋白后再加入loading buffer上样可以吗
如果可以水溶蛋白干粉，为什么双向电泳中要用到含有硫脲，尿素等的裂解液呢？如果不溶于水，那不是和我们已有理论蛋白溶于水不符合吗，如果这样那跑SDS-PAGE检测蛋白提取效果时是不是也应该先用裂解液溶解呢

初次做摸条件中望得到指教，不甚感激~~~
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1楼 2013-08-13 11:09:46
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
yanglu12315: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-08-13 16:43:11
总蛋白一般是溶在缓冲液里。直接用水会使蛋白的稳定性差，有些膜蛋白在水中的溶解度低。一般的蛋白干粉溶于水，如果膜蛋白浓度高的话水溶性差。跑SDS-PAGE的蛋白样品需要用loading buffer变性。
做双向电泳的水化液是为了变性蛋白，但不能使用如SDS这样的离子去垢剂，否则会破坏蛋白所带电荷。SDS-PAGE的样品不需要用双向电泳的水化液变性。因为你跑SDS-PAGE需要让所有蛋白的表面结合SDS。
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2楼2013-08-13 13:06:45
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yanglu12315

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-13 13:06:45
总蛋白一般是溶在缓冲液里。直接用水会使蛋白的稳定性差，有些膜蛋白在水中的溶解度低。一般的蛋白干粉溶于水，如果膜蛋白浓度高的话水溶性差。跑SDS-PAGE的蛋白样品需要用loading buffer变性。
做双向电泳的水化液 ...

明白了，谢谢
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3楼2013-08-13 16:43:31
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wuxiao549

禁虫 (著名写手)
本帖内容被屏蔽
4楼2013-08-13 16:49:43
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yanglu12315

铁虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by wuxiao549 at 2013-08-13 16:49:43
善意提醒一下，双向电泳里面道道很多，不是随便就做一下的。。楼主要多看看资料

谢谢3楼，我这双向完全没做过呢，现在只是初期想用SDS-PAGE摸索下提取条件，话说你有木有什么资料可供我这初手学习学习呢，可以发我邮箱yanglu12315@sina.com,不甚感激啦
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5楼2013-08-13 23:21:32
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奋斗中的喵喵

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-08-13 13:06:45
总蛋白一般是溶在缓冲液里。直接用水会使蛋白的稳定性差，有些膜蛋白在水中的溶解度低。一般的蛋白干粉溶于水，如果膜蛋白浓度高的话水溶性差。跑SDS-PAGE的蛋白样品需要用loading buffer变性。
做双向电泳的水化液 ...

跑SDS的话需要加蛋白裂解液么？

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6楼2018-01-02 20:58:59
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