24小时热门版块排行榜    

查看: 3335  |  回复: 13
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)

[求助] 引物设计 基因全长的获得

各位高手想向大家请教一下,我想扩一个基因的全长,包括这个基因的内含子,我现在有这个基因的编码cDNA序列,我该如何设计引物才能扩出这个基因的包含内含子的全长呢?我是不是可以在编码框外设计引物呢?我前一段时间跨起始密码子和终止密码子设计了一对引物,特异性不是很好!郁闷的!
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duoyidian

木虫 (正式写手)

引用回帖:
7楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-08-09 10:41:32
取高度保守的序列设计兼并引物又可能扩出来的是片段吧,我是想以基因组DNA为模板扩增全长,直接在cDNA序列上设计不可以吗?还有就是我做的这个植物的全基因组序列现在还不知道。我现在只有这个酶的cDNA序列。...

具体是什么植物啊,NCBI上能够blast出来的,我师兄就是这么做的他还说接着做了一个WALKING
9楼2013-08-09 11:50:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 14 个回答

duoyidian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
崔永霞: 金币+1, 有帮助, 非常感谢! 2013-08-09 10:44:46
我觉得这个你想从cDNA通过Pcr获得包含内含子的全长是不现实的,你的模板是C dna不是原来的dna,你可以通过生物信息学的方法,找数据库查看,输入你所知道的的cDNA,找到你要的蛋白以及原来的DNA。你得查查相关信息学的数据库了。。。具体操作你得自己摸索
2楼2013-08-08 18:52:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

崔永霞

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by duoyidian at 2013-08-08 18:52:09
我觉得这个你想从cDNA通过Pcr获得包含内含子的全长是不现实的,你的模板是C dna不是原来的dna,你可以通过生物信息学的方法,找数据库查看,输入你所知道的的cDNA,找到你要的蛋白以及原来的DNA。你得查查相关信息学 ...

我是以DNA为模板的,难道也不可能扩出全长吗?
每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
3楼2013-08-08 19:20:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

duoyidian

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
崔永霞: 金币+19, 有帮助, 非常感谢! 2013-08-09 10:46:25
引用回帖:
3楼: Originally posted by 崔永霞 at 2013-08-08 19:20:52
我是以DNA为模板的,难道也不可能扩出全长吗?...

你可以找到这个蛋白的CDS序列(如果其CDS序列是标出来的),去Blast,然后取其高度保守的部分,设计兼并引物来进行PCR,这样就可以了。不过还是要通过数据库的比对。。找出高度保守区的部分,设计兼并引物,这个很费事的
4楼2013-08-08 21:59:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] Filecode 又变了,巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] FileCode能看出啥? +8 要乐观耀哥 2026-08-10 26/1300 2026-08-13 12:01 by Tide man
[基金申请] 关于Filecode分析方法 +9 majunge000 2026-08-10 11/550 2026-08-13 10:40 by ZH远山
[基金申请] 奇怪,两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +7 布布和一二 2026-08-10 10/500 2026-08-12 09:12 by 布布和一二
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果? +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 有时候,自然基金真的不能太认真 (我的申报经验) +3 majunge000 2026-08-11 4/200 2026-08-11 20:13 by lch2012
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果,有咨询渠道??? +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 基金中了 +15 laoda193707 2026-08-06 15/750 2026-08-11 00:11 by jiafei2190
[基金申请] 确定了,国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 关于代码变化问题,想知道的进来 +17 且听虎啸 2026-08-07 24/1200 2026-08-10 18:35 by zhangduo2008
[基金申请] 静等基金结果 +5 gjjjzhong 2026-08-10 16/800 2026-08-10 17:19 by Tide man
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 据悉今年马上要出结果了 +7 瞬息宇宙 2026-08-10 8/400 2026-08-10 12:42 by Vivilian
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] fileCode有新解读? +10 Tide man 2026-08-08 18/900 2026-08-09 12:55 by 仁砚薪传
[基金申请] 关于filecode +4 布布和一二 2026-08-07 7/350 2026-08-07 22:55 by zhanghaozhu
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变,有变的大神么? +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
信息提示
请填处理意见