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引物设计 基因全长的获得
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崔永霞
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引物设计 基因全长的获得
各位高手想向大家请教一下,我想扩一个基因的全长,包括这个基因的内含子,我现在有这个基因的编码cDNA序列,我该如何设计引物才能扩出这个基因的包含内含子的全长呢?我是不是可以在编码框外设计引物呢?我前一段时间跨起始密码子和终止密码子设计了一对引物,特异性不是很好!郁闷的!
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克隆基因全长引物设计问题
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1楼
2013-08-08 17:20:17
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崔永霞
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2楼
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duoyidian
at 2013-08-08 18:52:09
我觉得这个你想从cDNA通过Pcr获得包含内含子的全长是不现实的,你的模板是C dna不是原来的dna,你可以通过生物信息学的方法,找数据库查看,输入你所知道的的cDNA,找到你要的蛋白以及原来的DNA。你得查查相关信息学 ...
我是以DNA为模板的,难道也不可能扩出全长吗?
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每个人都有心底最柔软的地方,请不要触碰它,因为每个人都有自己的尊严!
3楼
2013-08-08 19:20:52
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2013-08-09 10:44:46
我觉得这个你想从cDNA通过Pcr获得包含内含子的全长是不现实的,你的模板是C dna不是原来的dna,你可以通过生物信息学的方法,找数据库查看,输入你所知道的的cDNA,找到你要的蛋白以及原来的DNA。你得查查相关信息学的数据库了。。。具体操作你得自己摸索
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2楼
2013-08-08 18:52:09
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2013-08-09 10:46:25
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3楼
:
Originally posted by
崔永霞
at 2013-08-08 19:20:52
我是以DNA为模板的,难道也不可能扩出全长吗?...
你可以找到这个蛋白的CDS序列(如果其CDS序列是标出来的),去Blast,然后取其高度保守的部分,设计兼并引物来进行PCR,这样就可以了。不过还是要通过数据库的比对。。找出高度保守区的部分,设计兼并引物,这个很费事的
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4楼
2013-08-08 21:59:39
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崔永霞
at 2013-08-08 19:20:52
我是以DNA为模板的,难道也不可能扩出全长吗?...
你的问题这个这个链接的问题一样,你可以参考一下这个答案的
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=4485851&fpage=1
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5楼
2013-08-08 22:01:55
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