| 查看: 3001 | 回复: 16 | ||
怡红痴子金虫 (小有名气)
|
[求助]
TA克隆，假阳性？假阴性？ 已有1人参与
|
|
楼主初学TA克隆，经过一翻坎坷之后，终于小有成果，但是最近遇到了一个新的问题。 我是做土壤细菌氨氧化基因的TA克隆，目的片段大概490bp，用的载体试剂盒是TAKARA的pMD18-T，将PCR产物16℃过夜连接后，转入80uL大肠杆菌DH5a感受态细胞中，LB液体37℃，200rpm摇1h后，离心浓缩至150uL菌液涂板（含100ug/mL氨苄），然后倒置37℃过夜培养（大约12h）。次日共挑取了78个单菌落分别接种到1mL氨苄LB液体培养基中37℃、200rpm培养12h，取1uL菌液进行PCR（采用M13-47和RV-M这对载体通用引物），但是菌液PCR验证结果只有29个阳性克隆，其中有一个还混入了空载体算是废掉了，只剩28个，可是78个只有28个是阳性，这比率也太小了点吧？ 其他那49个没P出来的到底是氨苄筛选时的假阳性呢？还是菌液PCR时的假阴性？是不是我哪里没做好，请高人帮我分析一下原因，不胜感激！ PS：我同时做了阳性和阴性对照的，都很正常，阳性随机挑了9个菌落做PCR，验证结果都是阳性的 [ Last edited by 怡红痴子 on 2013-8-7 at 21:29 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有285人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有3人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- TA克隆电击法转化的步骤
已经有3人回复
- 核酸染料GelRed对胶回PCR收产物是否有影响？为何TA克隆少且全是蓝斑
已经有6人回复
- MTT 阳性 阴性
已经有8人回复
- 我做TA克隆，准备拿序列去测序。做完转化以后直接做个菌液PCR检验一下是否有目的
已经有31人回复
- TA克隆测序结果老是显示空载，这是为什么呢？？
已经有11人回复
- 最近做T克隆都是阴性，怎么回事？
已经有14人回复
- 菌液PCR没东西，但是提完质粒能跑出来条带，为什么啊？
已经有16人回复
- TA克隆为什么总是假阳性啊？
已经有39人回复
- TA克隆为什么长一片啊
已经有18人回复
- 求助高手，镜检（革兰氏染色），阳性肠球菌总是出现假阴性
已经有4人回复
- Amp、IPTG和X-gal的使用
已经有12人回复
- 枯草芽孢杆菌和液化淀粉芽孢杆菌怎么区分
已经有10人回复
- 虫子们有谁做过TA克隆呀？额想知道TA克隆的具体的实验步骤
已经有25人回复
- TA克隆遇到的问题
已经有10人回复
- X—Gal IPTG蓝白斑试验
已经有8人回复
- 【求助/交流】单克隆摇菌16小时后LB液体培养基还没有变混浊求原因
已经有23人回复
- 【求助/交流】大肠杆菌菌液，如何再扩增？
已经有13人回复
- 【求助/交流】重组质粒转化
已经有22人回复
- 【求助/交流】TA克隆为什么会长出蓝斑
已经有4人回复
2楼2013-08-08 10:49:23
怡红痴子
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1548.6
- 散金: 400
- 红花: 2
- 帖子: 72
- 在线: 72.5小时
- 虫号: 2515219
- 注册: 2013-06-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
3楼2013-08-08 11:00:59
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
4楼2013-08-08 11:35:15
怡红痴子
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1548.6
- 散金: 400
- 红花: 2
- 帖子: 72
- 在线: 72.5小时
- 虫号: 2515219
- 注册: 2013-06-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
5楼2013-08-08 14:35:52
wenzi6337
木虫 (著名写手)
- 应助: 27 (小学生)
- 金币: 3267.6
- 散金: 196
- 红花: 7
- 沙发: 1
- 帖子: 1364
- 在线: 413.8小时
- 虫号: 716576
- 注册: 2009-03-06
- 性别: GG
- 专业: 植物生理与生化
6楼2013-08-08 15:00:27
7楼2013-08-08 16:10:53
bullfrog325
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 1
- 应助: 193 (高中生)
- 金币: 2880.3
- 散金: 200
- 红花: 24
- 帖子: 744
- 在线: 269.5小时
- 虫号: 1864929
- 注册: 2012-06-20
8楼2013-08-08 18:22:14
怡红痴子
金虫 (小有名气)
- 应助: 0 (幼儿园)
- 金币: 1548.6
- 散金: 400
- 红花: 2
- 帖子: 72
- 在线: 72.5小时
- 虫号: 2515219
- 注册: 2013-06-20
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
9楼2013-08-09 10:28:57
cicelyzh
铁杆木虫 (职业作家)
- MolEPI: 10
- 应助: 1662 (讲师)
- 金币: 8693.8
- 红花: 72
- 帖子: 3516
- 在线: 456小时
- 虫号: 1614001
- 注册: 2012-02-13
- 专业: 生物化学
10楼2013-08-10 12:41:27
