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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » TA克隆，假阳性？假阴性？
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
楼主，推荐你用全式金的pEASY系列，利用DNA拓扑异构酶I，室温5分钟，快速克隆，跟Invitrogen的类似，但价格要低很多。我挑过的菌落全是阳性克隆。什么Takara、Promega都比不上。
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11楼2013-08-10 20:03:19
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swach

铁虫 (小有名气)
楼主，你好，我是刚开始做氨氧化的克隆的，你用的是什么引物以及pcr条件,可以告诉我下吗？我用文献上的引物和条件p出来的是两条条带，谢谢
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12楼2014-07-08 18:41:28
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怡红痴子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by swach at 2014-07-08 18:41:28
楼主，你好，我是刚开始做氨氧化的克隆的，你用的是什么引物以及pcr条件,可以告诉我下吗？我用文献上的引物和条件p出来的是两条条带，谢谢

The PCR amplification of bacterial amoA gene fragments were performed using the primer pair amoA-1F (5′-GGGGTTTCTACTGGTGGT-3′) and amoA-2R (5′-CCCCTCKGSAAAGCCTTCTTC-3′) (Rotthauwe et al. 1997) under the conditions described by Brown (et al. 2013).
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13楼2014-07-08 19:34:23
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swach

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
13楼: Originally posted by 怡红痴子 at 2014-07-08 19:34:23
The PCR amplification of bacterial amoA gene fragments were performed using the primer pair amoA-1F (5′-GGGGTTTCTACTGGTGGT-3′) and amoA-2R (5′-CCCCTCKGSAAAGCCTTCTTC-3′) (Rotthauwe et al. 1997) u ...

谢谢你，不过可不可以请你把Brown的文章题目给我一下呢？只有作者名字我不好检索，谢谢。
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14楼2014-07-09 11:00:20
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jurkat.1640

至尊木虫 (文坛精英)

【答案】应助回帖

做克隆有一个阳性就行了，不知道你要这么多阳性的干什么？
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15楼2014-07-09 14:50:53
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怡红痴子

金虫 (小有名气)
引用回帖:
14楼: Originally posted by swach at 2014-07-09 11:00:20
谢谢你，不过可不可以请你把Brown的文章题目给我一下呢？只有作者名字我不好检索，谢谢。...

Brown M.N., Briones A., Diana J., Raskin L. 2013. Ammonia-oxidizing archaea and nitrite-oxidizing nitrospiras in the biofilter of a shrimp recirculating aquaculture system. FEMS Microbiol Ecol 83: 17-25.
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16楼2014-07-10 09:50:15
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swach

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
16楼: Originally posted by 怡红痴子 at 2014-07-10 09:50:15
Brown M.N., Briones A., Diana J., Raskin L. 2013. Ammonia-oxidizing archaea and nitrite-oxidizing nitrospiras in the biofilter of a shrimp recirculating aquaculture system. FEMS Microbiol Ecol 83: 1 ...

谢谢！
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17楼2014-07-10 10:25:59
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