应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » ni柱纯化问题
51/1返回列表
查看: 3405  |  回复: 27
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

鸡鸣不已

铜虫 (正式写手)

[求助] ni柱纯化问题 已有1人参与

大家好，我最近用金斯瑞的Ni柱纯化我的蛋白（带His6），上样过程会穿过挺多，吸附也较弱（说明书上的缓冲液
Lysis  Equilibration Buffer (LE buffer):   50 mM NaH 2 PO4,   300  mM NaCl, pH  8.0 
Wash  Buffer:    50 mM NaH 2 PO4, 300  mM NaCl, 10 mM imidazole,   pH  8.0 
Elution  buffer:   50 mM NaH 2 PO4, 300  mM  NaCl,  250  mM imidazole, pH 8.0 
就是用10mM咪唑洗杂，我用10mM咪唑基本洗脱了），想问大家，Ni柱有哪些上样方式，可以把柱材和我样品混匀过夜，第二天装柱吗？大家平时还用什么缓冲液效果好，谢谢大家
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

蛋白质生物学实验经验

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-08-06 11:13:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鸡鸣不已

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by bullfrog325 at 2013-08-06 15:57:26
似乎楼主是在让蛋白变性的情况下做的, 出现这个问题很大可能是因为蛋白折叠使得His标签不能充分暴露造成的.

没有变性，先过阴离子柱（Q sephrose fast flow),再过Ni柱
赞一下 回复此楼
6楼2013-08-06 20:39:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 28 个回答

zhang1zheng2

至尊木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
鸡鸣不已: 金币+5, ★有帮助, TKS 2013-08-07 20:33:02
NI柱旧了吧， 再生后试了么？
赞一下 回复此楼
手握日月摘星辰，看透生死破凡尘
2楼2013-08-06 11:19:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

鸡鸣不已

铜虫 (正式写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhang1zheng2 at 2013-08-06 11:19:33
NI柱旧了吧， 再生后试了么？

再生了，还是有穿过，且低浓度咪唑就部分洗下来了。柱子柱材有3.5ml左右，按说明书上每1ml可吸附20mg蛋白，应该完全可以吸附的呀。你说我可以将柱材和样品混匀颠倒过夜，第二天再装柱吗，谢谢
赞一下 回复此楼
3楼2013-08-06 15:23:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhang1zheng2

至尊木虫 (职业作家)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 鸡鸣不已 at 2013-08-06 15:23:34
再生了，还是有穿过，且低浓度咪唑就部分洗下来了。柱子柱材有3.5ml左右，按说明书上每1ml可吸附20mg蛋白，应该完全可以吸附的呀。你说我可以将柱材和样品混匀颠倒过夜，第二天再装柱吗，谢谢...

对不起，没试过，只能说：可能吧。
赞一下 回复此楼
手握日月摘星辰，看透生死破凡尘
4楼2013-08-06 15:30:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 28 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[教师之家] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 8/400 2026-08-30 05:48 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 G6APbkg8SA6w 2026-08-29 5/250 2026-08-30 02:40 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 4/200 2026-08-30 02:09 by ZPa0EcMwuECS
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 3/150 2026-08-30 01:58 by ZPa0EcMwuECS
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:36 by ZPa0EcMwuECS
[论文投稿] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +4 gy1nBQXYQJqL 2026-08-29 6/300 2026-08-30 01:25 by ZPa0EcMwuECS
[公派出国] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 7/350 2026-08-30 01:12 by ZPa0EcMwuECS
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +6 ASdOkHsho7FD 2026-08-28 9/450 2026-08-30 01:04 by ZPa0EcMwuECS
[基金申请] 中青基了要发朋友圈吗？ +4 349506619 2026-08-28 4/200 2026-08-29 22:41 by alongwaytogo
[基金申请] 国自然面上复盘~欢迎讨论 (金币+15) +15 晴天加油 2026-08-26 16/800 2026-08-29 18:28 by symmetry
[基金申请] 有没有仍没收到信息的 +5 德尚中行 2026-08-27 6/300 2026-08-29 18:10 by manplx
[基金申请] 麻烦专家们看看评委们的意见（F口面上） +5 gdd2018 2026-08-28 10/500 2026-08-29 14:10 by Jacob678
[基金申请] 基金不中，共勉 +11 eulota 2026-08-26 11/550 2026-08-28 14:22 by 火星超人xi
[基金申请] 哪位高人中了，把查询到的截图贴出来让我看看，让我长长见识 +5 yuleib84 2026-08-26 6/300 2026-08-28 00:02 by yudaoqian88
[基金申请] 看板上这么多中的，有点像50人群里49个人都是骗子的那种感觉…… +5 a089 2026-08-26 6/300 2026-08-27 14:05 by jonewore
[基金申请] 2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？ +25 木水思豆 2026-08-25 28/1400 2026-08-26 14:53 by draco1987
[基金申请] 能否退出参与的面上项目解除限项 +23 koalala 2026-08-24 26/1300 2026-08-26 14:29 by 宝贝虫子
[基金申请] 系统进不去 +4 yanglien 2026-08-26 5/250 2026-08-26 11:10 by wenfengw83
[基金申请] 国合可查了 +3 paperzjh 2026-08-26 3/150 2026-08-26 10:41 by LemmonTr
[基金申请] 某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感 +9 yuleib84 2026-08-25 10/500 2026-08-25 17:14 by alexon
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭