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七彩泡泡1213

新虫 (初入文坛)

[求助] 14kd蛋白以及180kd蛋白做western转膜时的参数

做14kd蛋白时,sds分离胶浓度应该用多大,还有它western转膜用湿转电压电流的参数以及转膜时间应该是怎样的?还有180-200kd的蛋白western转膜用湿转的各类参数又是怎样的?请各位高手指点!谢谢
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lugylucy

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-02 21:56:03
14kDa的用12%的胶就行,我们实验室用半干转,100mA/一张膜,1h。180-200的这两个星期我一直都在摸,结果很不怎么样。不过我师姐她之前180kDa的   湿转300mA 3h有杂出她的目的蛋白。
2楼2013-08-02 20:44:27
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jiang701820

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助! 2013-08-04 00:14:31
14kda的用12%,180kda的用10%就可以了,转膜的话湿转,转膜液配方:3.03g trisbase,14.4g甘氨酸,200ml甲醇配成1L即可,转膜时恒压200mA左右(2张膜),保证初始电压在100-130V之间,14kDa的转45-60min,180kDA的转90-120min均可。Good luck!
3楼2013-08-03 16:03:14
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