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七彩泡泡1213

新虫 (初入文坛)

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[求助] 14kd蛋白以及180kd蛋白做western转膜时的参数

做14kd蛋白时，sds分离胶浓度应该用多大，还有它western转膜用湿转电压电流的参数以及转膜时间应该是怎样的？还有180-200kd的蛋白western转膜用湿转的各类参数又是怎样的？请各位高手指点！谢谢

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1楼 2013-07-29 16:03:36

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lugylucy

新虫 (初入文坛)

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kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-08-02 21:56:03

14kDa的用12%的胶就行，我们实验室用半干转，100mA/一张膜，1h。180-200的这两个星期我一直都在摸，结果很不怎么样。不过我师姐她之前180kDa的湿转300mA 3h有杂出她的目的蛋白。

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2楼2013-08-02 20:44:27

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jiang701820

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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-08-04 00:14:31

14kda的用12%，180kda的用10%就可以了，转膜的话湿转，转膜液配方：3.03g trisbase，14.4g甘氨酸，200ml甲醇配成1L即可，转膜时恒压200mA左右（2张膜），保证初始电压在100-130V之间，14kDa的转45-60min，180kDA的转90-120min均可。Good luck！

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3楼2013-08-03 16:03:14

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