| 查看: 1169 | 回复: 5 | |||
[求助]
构建质粒的问题
|
|
最近在构建一个质粒，化之后总是长不出菌来。很是苦恼 具体过程是：载体是一个Amp+的质粒，目的片段则含有kan+的抗性。目的片段用Taq plus酶P的，质粒经XcmI酶切后，和PCR片段一起跑电泳，然后割胶回收，回收的时候先PCR产物过柱，再酶切产物过柱，洗脱下来的产物取 再加入T4连接酶，4度过夜，第二天做转化。 之前转化都不长，昨天试了一下用单纯的质粒转化同一批次的感受态细胞，能长出一大片菌来，所以可以排除感受态和转化时操作有误的问题。问题应该出在连接上，求助各位，接下来应该怎么办？  酶切体系：dd水 27u 质粒8u buffer 4u XcmI酶 1u 用的是NEB的 37度 水浴2小时 跑胶的时候 20u PCR产物+4u 溴酚蓝 20u酶切产物+ 4u溴酚蓝（2个孔，共40u酶切产物） 连接体系：35u洗脱下来的回收产物，4u buffer 1u T4连接酶 [ 来自小组 生物医药家族 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
含氟糖皮质激素的外用抗炎利器醋酸氟轻松
已经有0人回复
-
阿莫奈韦（Amenamevir）：解旋酶-引物酶靶向分子的结构特征与合成路径全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有186人回复
-
利瑞鲁单抗：靶向KIR的NK细胞检查点工具抗体，结构基础与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助——质粒构建问题
已经有10人回复
- 质粒载体构建的问题！
已经有5人回复
- 重组质粒的构建
已经有5人回复
- pET-22b构建好了质粒，表达不出来？
已经有7人回复
- 我构建质粒后酶切验证的问题
已经有13人回复
- pEASY-E1使用中出现的问题
已经有9人回复
- 质粒构建疑难杂症
已经有22人回复
- 质粒构建
已经有13人回复
- 关于农杆菌单菌株/双质粒表达载体的构建问题
已经有14人回复
- 构建好的质粒如何防止丢失
已经有12人回复
- 关于SiRNA表达载体构建的问题
已经有9人回复
- 表达载体的构建
已经有17人回复
- 【求助/交流】构建质粒问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】关于重组质粒的构建，总是失败，希望高手指点一下啊～～
已经有16人回复
- 【求助/交流】质粒PCR产物的回收（质粒构建）
已经有11人回复
- 【求助/交流】请教质粒构建问题
已经有9人回复
- 【求助/交流】关于质粒构建与表达的问题
已经有14人回复
2楼2013-07-17 17:22:04
3楼2013-07-17 17:32:15
4楼2013-07-17 17:35:20
摩尔比要怎么算啊……能指导一下吗？谢谢 5楼2013-07-17 18:23:08
6楼2013-07-17 18:25:18
