应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 提取细菌基因组DNA时总是会有蛋白残留
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 2469  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

植语

金虫 (小有名气)

[求助] 提取细菌基因组DNA时总是会有蛋白残留

提取细菌基因组DNA时总是会有蛋白残留，电泳时，用不同浓度的胶跑出来的效果差距也很远，左边是0.6%的胶右边是1.0%的胶，，加样孔下方一点点的亮条带是不是蛋白残留的结果啊？
提取细菌基因组DNA时总是会有蛋白残留
DSC00591.JPG
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-07-17 16:25:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huanghznd

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
植语(gyesang代发): 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-17 16:37:10
是的。细菌基因组DNA时有蛋白残留时，跑胶有拖带的现象，胶浓度低，孔径大，拖得更明显。点样孔下的残留的就是蛋白。可以用酚氯仿重新抽提，可以去除一此蛋白。
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

植语
2楼2013-07-17 16:32:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

植语

金虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by huanghznd at 2013-07-17 16:32:58
是的。细菌基因组DNA时有蛋白残留时，跑胶有拖带的现象，胶浓度低，孔径大，拖得更明显。点样孔下的残留的就是蛋白。可以用酚氯仿重新抽提，可以去除一此蛋白。

之前纯化过，还是会有，后来换了新的酚氯仿，好了一些，，但做PCR还是得不到目标条带，，，不知道多糖残留会不会也是像图中那样，加样孔下面一点点有亮带，，还有，提的DNA用水溶解有时会很粘稠，不知道是残留了什么？  也很想知道我是用CTAB法提的DNA，不知道SDS和CTAB是在哪步被去除的，，是用异丙醇沉淀的时候溶解在了异丙醇里吗？说是CTAB易溶于异丙醇
赞一下 回复此楼
3楼2013-07-17 22:17:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fuyuandj86

版主 (著名写手)

己所不欲，勿施于人
看看OD260/OD280的比例对不对,就能确定蛋白残留量有多少
赞一下 回复此楼
The doer of good becomes good, the doer of evil becomes evil.
4楼2013-07-18 00:37:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
植语: 金币+5, ★有帮助 2013-07-19 10:46:00
引用回帖:
3楼: Originally posted by 植语 at 2013-07-17 22:17:57
之前纯化过，还是会有，后来换了新的酚氯仿，好了一些，，但做PCR还是得不到目标条带，，，不知道多糖残留会不会也是像图中那样，加样孔下面一点点有亮带，，还有，提的DNA用水溶解有时会很粘稠，不知道是残留了什 ...

如果只是做PCR的模板，DNA不用很纯，按照普通方法提就行了，也不用特意去掉残留的蛋白和多糖。PCR中的模板所用的基因组DNA用量非常少，一般提出来的gDNA要经过稀释，细菌用1-10ng就够了。
赞一下 回复此楼
5楼2013-07-18 01:48:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

maidi12

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
6楼2013-07-18 08:39:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
植语: 金币+3, ★有帮助 2013-07-19 10:46:17
成像的时候你是不是把托盘也放进去了？
点样孔有残留首先要排除制胶的问题，看marker孔是否也同样残留。
如排除胶的问题，那建议用低浓度（0.6-0.8%）的胶，5V/cm慢慢跑。
不过其实有一点点蛋白残留一般也不影响PCR。
另外就是在提取过程如果是酚/氯仿抽取时要充分振荡、混匀而且吸取上清时注意不要吸到中间层的蛋白沉淀。
赞一下 回复此楼
伟大航线....
7楼2013-07-18 10:14:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

植语

金虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-18 01:48:32
如果只是做PCR的模板，DNA不用很纯，按照普通方法提就行了，也不用特意去掉残留的蛋白和多糖。PCR中的模板所用的基因组DNA用量非常少，一般提出来的gDNA要经过稀释，细菌用1-10ng就够了。...

DNA用量这么少？我跑PCR，25ul的体系，用的量在50ng左右是不是反而会出不了目标条带？
赞一下 回复此楼
8楼2013-07-18 14:53:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

植语

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by longrna at 2013-07-18 10:14:30
成像的时候你是不是把托盘也放进去了？
点样孔有残留首先要排除制胶的问题，看marker孔是否也同样残留。
如排除胶的问题，那建议用低浓度（0.6-0.8%）的胶，5V/cm慢慢跑。
不过其实有一点点蛋白残留一般也不影响 ...

想知道是不是提细菌基因组DNA一般都会有蛋白或其他杂质残留？
赞一下 回复此楼
9楼2013-07-18 14:54:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

引用回帖:
8楼: Originally posted by 植语 at 2013-07-18 14:53:13
DNA用量这么少？我跑PCR，25ul的体系，用的量在50ng左右是不是反而会出不了目标条带？...

50ng是稍微多一点，不过也不算特别多，可以P出来的。
赞一下 回复此楼
10楼2013-07-19 01:03:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 植语 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料与化工328分调剂 +7 。，。，。，。i 2026-03-23 7/350 2026-03-29 20:58 by 唐沐儿
[考研] 311求调剂 +6 冬十三 2026-03-24 6/300 2026-03-29 20:45 by 无际的草原
[考研] 总分293求调剂 +8 加一一九 2026-03-25 11/550 2026-03-29 19:53 by 无际的草原
[考研] 299求调剂 +10 15188958825 2026-03-25 10/500 2026-03-29 17:51 by 王亮_大连医科大
[考研] 070300化学354求调剂 +6 101次希望 2026-03-28 6/300 2026-03-29 12:57 by 无际的草原
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
[考研] 0703本科郑州大学求调剂 +3 nhj_ 2026-03-25 3/150 2026-03-28 13:24 by Iveryant
[考研] 085404求调剂，总分309，本科经历较为丰富 +4 来财aa 2026-03-25 4/200 2026-03-28 07:41 by 棒棒球手
[考研] 一志愿211院校 344分 东北农业大学生物学学硕，求调剂 +5 丶风雪夜归人丶 2026-03-26 8/400 2026-03-27 19:22 by 丶风雪夜归人丶
[考研] 266分求材料化工冶金矿业等专业的调剂 +4 哇呼哼呼哼 2026-03-26 4/200 2026-03-27 17:02 by zhyzzh
[考研] 274求调剂 +17 顾九笙要谦虚 2026-03-24 23/1150 2026-03-27 15:16 by caszguilin
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-25 7/350 2026-03-27 14:47 by 狂炫麦当当
[考研] 08开头275求调剂 +4 拉谁不重要 2026-03-26 4/200 2026-03-27 14:12 by Delta2012
[考研] 324求调剂 +5 hanamiko 2026-03-26 5/250 2026-03-27 10:33 by wangjy2002
[考研] 一志愿河工大 081700 276求调剂 +4 地球绕着太阳转 2026-03-23 4/200 2026-03-26 14:27 by zzll406
[考研] 309求调剂 +4 gajsj 2026-03-25 5/250 2026-03-26 00:27 by Dyhoer
[考研] 290分调剂求助 +3 吉祥止止陈 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:58 by barlinike
[考研] 材料专硕 335 分求调剂 +4 拒绝冷暴力 2026-03-25 4/200 2026-03-25 18:45 by haxia
[考研] 318求调剂 +3 plum李子 2026-03-23 3/150 2026-03-25 09:42 by 雾散后相遇lc
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭