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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hyc_charles

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切和PCR问题，求大神 已有1人参与

大家好，我做的是大麦总DNA的AFLP分子标记，第一步是双酶切，酶用的是MseI和EcoRI，体系MseI 1 μL，EcoRI 1 μL，模板500 ng，EcoRI Buffer 5 μL，BSA 0.5 μL，用ddH2O补足50μL，酶切产物呈smear状，但是非常的淡，能不能给解释一下呢，谢谢了！！

另外，接下来进行连接，预扩增，选择性扩增，选扩产物进行1%琼脂糖电泳，呈大片段的smear状，这是为什么啊，还有胶孔里怎么有东西残留呢，选扩之前跑电泳孔里没东西的。。。。。
双酶切和PCR问题，求大神
酶切产物.jpg


双酶切和PCR问题，求大神-1
二扩产物.jpg
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不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
1楼 2013-07-12 17:23:50
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:15
你查过这两个限制酶的buffer一样吗？然后你把你的质粒和你酶切完的一起跑电泳看看
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2楼2013-07-12 20:15:22
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hyc_charles

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 幽魂银龙 at 2013-07-12 20:15:22
你查过这两个限制酶的buffer一样吗？然后你把你的质粒和你酶切完的一起跑电泳看看

谢谢，我做的是总DNA，不是质粒，buffer用EcoRI的buffer，这个我是查过的，没有问题
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3楼2013-07-12 20:29:09
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:25
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4楼2013-07-13 23:39:12
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hyc_charles

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by basler at 2013-07-13 23:39:12
我觉得你应该考虑一下酶切是否成功，图上感觉没有看到酶切产物，只有你的总DNA

谢谢！那个酶切产物非常淡…请问有什么好办法确定酶切没问题吗，我们一般就是跑琼脂糖看一下～

[ 发自小木虫客户端 ]
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5楼2013-07-14 08:14:52
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:33
总DNA的反应速率应该是比较慢，或者说你的底物量有点少
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6楼2013-07-14 08:45:07
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hyc_charles

金虫 (小有名气)
没有人会嘛，二扩产物为什么从头到尾的弥散！！！我已经卡在这里一个月了，真是要疯了- -
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7楼2013-07-15 20:35:41
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xiaohaixie

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

没看见酶切下来的片段啊，是不是没切开
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Thehardyouwork,theluckyyouwill.年轻就要多吃苦
8楼2013-07-17 10:10:45
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懒洋洋羊吃草

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:44
BSA是不是稀释10倍啊 ，那不是加5ul吗
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休近小阑干，夕阳无限山
9楼2013-07-30 11:11:43
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susan小水

铁虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:52
加油了！我做的是RFLP,之前遇到的问题是dna量太少  不知你是否是
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原谅我一生，放纵不羁爱自由
10楼2013-08-14 20:56:42
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