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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 双酶切和PCR问题，求大神
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hyc_charles

金虫 (小有名气)

[求助] 双酶切和PCR问题，求大神 已有1人参与

大家好，我做的是大麦总DNA的AFLP分子标记，第一步是双酶切，酶用的是MseI和EcoRI，体系MseI 1 μL，EcoRI 1 μL，模板500 ng，EcoRI Buffer 5 μL，BSA 0.5 μL，用ddH2O补足50μL，酶切产物呈smear状，但是非常的淡，能不能给解释一下呢，谢谢了！！

另外，接下来进行连接，预扩增，选择性扩增，选扩产物进行1%琼脂糖电泳，呈大片段的smear状，这是为什么啊，还有胶孔里怎么有东西残留呢，选扩之前跑电泳孔里没东西的。。。。。
双酶切和PCR问题，求大神
酶切产物.jpg


双酶切和PCR问题，求大神-1
二扩产物.jpg
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不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
1楼 2013-07-12 17:23:50
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肃清华书

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:33
总DNA的反应速率应该是比较慢，或者说你的底物量有点少
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6楼2013-07-14 08:45:07
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幽魂银龙

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:15
你查过这两个限制酶的buffer一样吗？然后你把你的质粒和你酶切完的一起跑电泳看看
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2楼2013-07-12 20:15:22
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hyc_charles

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 幽魂银龙 at 2013-07-12 20:15:22
你查过这两个限制酶的buffer一样吗？然后你把你的质粒和你酶切完的一起跑电泳看看

谢谢，我做的是总DNA，不是质粒，buffer用EcoRI的buffer，这个我是查过的，没有问题
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不但要做一个优秀的人，更要做一个无可取代的人…
3楼2013-07-12 20:29:09
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匿名

用户注销 (著名写手)
★
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 2013-08-30 16:53:25
本帖仅楼主可见
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4楼2013-07-13 23:39:12
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