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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 荧光定量引物疑问
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617004340

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量引物疑问

新手准备做荧光定量PCR呢，大家看看这对引物咋样啊，有啥问题没有啊，小弟不是很懂的，希望大家指导、拍砖。还有一问题就是这个错配是啥情况啊？求解
荧光定量引物疑问
Screenshot20130704210939.jpg
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1楼 2013-07-04 21:12:41
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰，手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-04 22:24:17
617004340: 金币+2, ★有帮助 2013-07-05 12:44:06
哥们，这引物就别用了。。。ΔG越小说明结合越稳定。。最好别出现小于-5的。。你这引物明显都是引物错配，。，换吧。。选择分数高
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2楼2013-07-04 21:37:33
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★
617004340: 金币+1, ★有帮助 2013-07-06 15:39:07
错配就是在模板或者引物上，在你设计引物的位置之外，还有某个地方，引物结合上去的可能性也很大。。
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3楼2013-07-04 21:39:10
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617004340

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 21:37:33
哥们，这引物就别用了。。。ΔG越小说明结合越稳定。。最好别出现小于-5的。。你这引物明显都是引物错配，。，换吧。。选择分数高

这个就是最好的啊，其他的都有发卡结构和二聚体的，我都不知道该咋整了
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4楼2013-07-05 09:33:10
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love_st

金虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
617004340: 金币+1, ★有帮助 2013-07-05 12:44:42
可以尝试下，虽然二聚体G值较高，但是也是在中间，可能也不会有产物，顶多就是引物用多点而已
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5楼2013-07-05 09:35:13
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0700901104

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:48:42
617004340: 金币+1 2013-07-05 12:44:50
错配较多，GC含量差距有点大，Tm值差将近5度 如果没有别的引物可以选择也可以试试 如果上荧光熔解曲线没有双峰也可以用的。荧光的时候的温度要比合成引物单上的Tm值大2-3度。
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别爱的太迟，别忽略了亲情，别什么都没了才后悔！
6楼2013-07-05 09:39:20
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yzz597187

新虫 (初入文坛)
你这个3，的错配不多，应该勉强可以，你可以先合成来试一下
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7楼2013-07-20 18:52:56
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