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617004340

金虫 (小有名气)

[求助] 荧光定量引物疑问

新手准备做荧光定量PCR呢,大家看看这对引物咋样啊,有啥问题没有啊,小弟不是很懂的,希望大家指导、拍砖。还有一问题就是这个错配是啥情况啊?求解
荧光定量引物疑问
Screenshot20130704210939.jpg
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0700901104

金虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-05 09:48:42
617004340: 金币+1 2013-07-05 12:44:50
错配较多,GC含量差距有点大,Tm值差将近5度 如果没有别的引物可以选择也可以试试 如果上荧光熔解曲线没有双峰也可以用的。荧光的时候的温度要比合成引物单上的Tm值大2-3度。
别爱的太迟,别忽略了亲情,别什么都没了才后悔!
6楼2013-07-05 09:39:20
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
myprayer: 金币+1, 赠人玫瑰,手有余香。分子生物版块 期待你的精彩和更详细的解答。 2013-07-04 22:24:17
617004340: 金币+2, 有帮助 2013-07-05 12:44:06
哥们,这引物就别用了。。。ΔG越小说明结合越稳定。。最好别出现小于-5的。。你这引物明显都是引物错配,。,换吧。。选择分数高
2楼2013-07-04 21:37:33
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖


617004340: 金币+1, 有帮助 2013-07-06 15:39:07
错配就是在模板或者引物上,在你设计引物的位置之外,还有某个地方,引物结合上去的可能性也很大。。
3楼2013-07-04 21:39:10
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617004340

金虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 21:37:33
哥们,这引物就别用了。。。ΔG越小说明结合越稳定。。最好别出现小于-5的。。你这引物明显都是引物错配,。,换吧。。选择分数高

这个就是最好的啊,其他的都有发卡结构和二聚体的,我都不知道该咋整了
4楼2013-07-05 09:33:10
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