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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR结果分析
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舟之帆

木虫 (小有名气)

[求助] PCR结果分析

各位大侠求救啊：
   我最近一直在做PCR，前天提的CDNA（总RNA纯度为1.4多），昨天PCR，结果跑出了单一条带（即我的目的基因），可是今天又提了CDNA（总RNA纯度为1.5多），步骤方法都一样，今天顺便PCR，结果发现P出了好多杂带，这是为什么啊？
   PCR结果有好多杂带，如果按这个条件可以做实时荧光定量PCR不？
   小女子不胜感激-------
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1楼 2013-07-04 17:00:43
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
舟之帆: 金币+5 2013-07-04 21:51:31
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 22:20:39
好多杂带是不能做荧光定量的。。另外，，rna纯度是什么概念？浓度吗？浓度高不一定质量也高，RNA要看浓度，看260/280的值，要在2.0左右。还要跑胶看条带，有无降解。。祝好、、可以交流
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舟之帆
2楼2013-07-04 21:45:37
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舟之帆

木虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 21:45:37
好多杂带是不能做荧光定量的。。另外，，rna纯度是什么概念？浓度吗？浓度高不一定质量也高，RNA要看浓度，看260/280的值，要在2.0左右。还要跑胶看条带，有无降解。。祝好、、可以交流

RNA浓度有0.4ug/ul，260/280大概1.6。
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3楼2013-07-04 21:51:17
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by 舟之帆 at 2013-07-04 21:51:17
RNA浓度有0.4ug/ul，260/280大概1.6。...

哥们，1.6。。。。你跑个胶看下吧。我觉得这RNA的质量不太好。。
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4楼2013-07-04 21:53:23
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gyesang

荣誉版主 (著名写手)

优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
舟之帆: 金币+1, ★有帮助, 细胞 2013-07-08 14:04:34
你是从什么材料里面提取的RNA，260/280 1.4或者1.5确实低了点，不知道你是否有跑DNA胶看下你的RNA的完整度
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学术问题讨论咨询发邮件gyesang@163.com
5楼2013-07-04 22:22:30
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舟之帆

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 21:45:37
好多杂带是不能做荧光定量的。。另外，，rna纯度是什么概念？浓度吗？浓度高不一定质量也高，RNA要看浓度，看260/280的值，要在2.0左右。还要跑胶看条带，有无降解。。祝好、、可以交流

我改了一下退火温度，结果是比较好的，可是还是有点拖尾，想问问是怎么回事，怎么办？辛苦了！
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6楼2013-07-08 14:15:58
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舟之帆

木虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 武穆大成 at 2013-07-04 21:45:37
好多杂带是不能做荧光定量的。。另外，，rna纯度是什么概念？浓度吗？浓度高不一定质量也高，RNA要看浓度，看260/280的值，要在2.0左右。还要跑胶看条带，有无降解。。祝好、、可以交流

我改了一下退火温度，结果是好点了，可是还是有点拖尾，怎么回事，怎么办？辛苦了，麻烦了....
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    • 2013-07-08 14:20:16, 497 K
7楼2013-07-08 14:20:47
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武穆大成

木虫 (著名写手)

笨蛋

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★
gyesang: 金币+2, 感谢应助！ 2013-07-08 15:21:35
舟之帆: 金币+2 2013-07-19 21:34:13
舟之帆: 金币+2, ★★★很有帮助 2013-09-04 19:13:25
引用回帖:
7楼: Originally posted by 舟之帆 at 2013-07-08 14:20:47
我改了一下退火温度，结果是好点了，可是还是有点拖尾，怎么回事，怎么办？辛苦了，麻烦了.......

这位童鞋。。我猜，你给我看的应该是反转录后pcr的结果，我个人觉着这个结果还是挺好的。但还是有点拖尾。。拖尾的原因有可能是因为模板浓度有点大，可以做个梯度稀释下再跑pcr看看。。还有就是有可能是非特异扩增，这个是不是得做个荧光定量看下。看下溶解曲线怎么样，。。祝好
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8楼2013-07-08 15:06:23
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