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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 克隆表达 引物设计
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ljj0720

银虫 (正式写手)

[求助] 克隆表达 引物设计

急急急  现在我知道某基因的全长 要扩增全长 引物怎么设计啊  网上有这样说的：


1、从你的全长基因的正义链直接数出16-20个碱基（从ATG开始），然后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
2、从你的全长基因的反义链从5’-3‘端直接数出16-20个碱基，后在它的5‘端加上游酶切位点，如果需要的话加上保护碱基。
这样引物就设计好了。
注意：上下游的酶切位点不要设计反了。



难道不用软件分析吗

[ Last edited by 1949stone on 2013-7-5 at 09:46 ]
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1楼 2013-07-04 15:48:58
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
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gyesang: 金币+2, 鼓励回帖应助！ 2013-07-04 19:47:04
要分析的就是16-20个碱基那里的变化了。不过我会选择更长区域。下游引物可以选择在终止密码子后面，是不影响读码框的，还可以优化一下。
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为什么
5楼2013-07-04 18:06:49
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547star

木虫 (著名写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 18:22:17
那如果选择密码子后面的碱基作为引物 那样扩增出来的  还是原来基因吗 我刚刚做  所以好多不懂  希望您可以指导一下 谢谢...

上下游引物一起来保证特异性，通常得到的还是原来的基因，只是比单纯的编码区长一些。
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为什么
13楼2013-07-04 19:10:52
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547star

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
gyesang: 金币+2, 鼓励回帖交流！ 2013-07-06 01:59:20
引用回帖:
14楼: Originally posted by ljj0720 at 2013-07-04 19:16:14
我目的是要扩增出来后  做蛋白 比单纯的编码区长一些  那样能得到目的蛋白吗...

没问题。翻译的时候到终止密码子就结束了。天然的基因都能表达，你不过是扩增出来克隆到表达载体表达而已。克隆表达时要注意读码框正确。抽空补一下分子生物学的基础知识吧，欠缺太多，会有各种问题，这个时候读书效率比上论坛高很多。
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为什么
15楼2013-07-04 19:31:38
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