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药代动力学中提取回收率低的问题已有2人参与
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请教各位大侠，我做一个中药两个成分的药代动力学， 方法为2倍量甲醇直接沉淀蛋白，上清液吹干，复溶。 回收率做法：吸相应高中低浓度的标准品溶液吹干，加200ul空白血浆，在按血浆处理办法处理，记录峰面积A1。洗相应高中低标准品溶液吹干，定容至相应浓度，记录峰面积A2。所得回收率=A1/A2，值在70%~76%之间，文献报道为90%以上。而且质控样品每个浓度平行的五份中每份的峰面积有所差异，标准曲线做出来也很丑，不能达到要求。 我想请教各位在做质控样品时，取相应标准品溶液吹干后，是直接加空白血浆混匀呢，还是先加甲醇混匀后在加空白血浆好（我所测两成分不溶于水）。这种回收率是不是证明方法有问题啊，还是操作不当。跪求各位大侠指导。谢谢 |
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5楼2015-11-03 22:10:03
airhblue11
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【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
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直接用甲醇沉淀的方法，70~76%我觉得已经是可接受的范围了，个人觉得在能测到的前提下，提取回收率达不到90%也无所谓，只要低中高浓度下它的回收率比较平稳就可以。 如果觉得回收率低，可以考虑用其他方法，如极性比较小的话考虑用乙酸乙酯萃取，也可以加入少量甲醇后用乙酸乙酯萃取，也可以用其他二元试剂。如果化合物热或光不稳定，那就要低温、避光处理或甲醇一步沉淀法，也可以考虑加入一些酸进行保护。 还有提取回收率做法与我常用的方法有区别：我是往空白血浆中加入不同浓度标准品溶液，然后按样品处理;另一份是空白血浆吹干后加相应标准品溶液复溶。 |
2楼2013-06-30 10:32:11
3楼2013-07-03 19:51:09
kkbyb
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4楼2013-07-03 22:01:38
10