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汕头大学海洋科学接受调剂
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hia_25

铁虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE电泳

大家好,请教一个问题:最近做SDS-PAGE电泳,发现每次跑完胶,撬开薄板以后,胶的下端总是裙边状,就是比上端要宽很多,做western杂的小分子带总是弯的,不知道怎么回事,很苦恼。分离胶的浓度是10%,80V或者90V恒压跑全程,溴酚蓝前沿出胶大约需要两个半小时。开始怀疑是跑时间长了,胶太热变形了,后来冰浴跑,还是一样。请各位资深高手指教啊!
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myprayer

专家顾问 (著名写手)

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-06-27 20:01:24
1949stone: 回帖置顶 2013-07-09 15:11:59
可能的原因
凝胶不均匀冷却,中间冷却不好
可能装置不合适, 凝胶和玻璃挡板底有bubble,或者俩遍聚合不完全
样品溶解不好
样品中含有不溶性颗粒
电极不平衡或者加样位置偏了
加样量过多

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2013-06-26 22:51:35
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普通回帖

myprayer

专家顾问 (著名写手)

优秀版主

【答案】应助回帖


kx444555: 金币+1, 鼓励交流 2013-07-09 13:19:30
3楼2013-06-26 22:54:37
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Roger01

木虫 (著名写手)

生命中会遇到一个这样的女子,当她出现时,会成为你的全部,当她离开后,会带走你的所有······
4楼2013-06-26 23:44:56
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青荷初想

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
用薄板做western,图一般会不好看,我们实验室一般都是用1.5mm的,图还是不错的!
5楼2013-06-27 16:20:16
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hia_25

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
5楼: Originally posted by 青荷初想 at 2013-06-27 16:20:16
用薄板做western,图一般会不好看,我们实验室一般都是用1.5mm的,图还是不错的!

嗯,我们一直都用1.0的,总是有这样那样的问题,也不知道是不是这个胶板的问题。可以尝试一下,谢谢提醒
6楼2013-07-01 10:07:55
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hia_25

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-26 22:51:35
可能的原因
凝胶不均匀冷却,中间冷却不好
可能装置不合适, 凝胶和玻璃挡板底有bubble,或者俩遍聚合不完全
样品溶解不好
样品中含有不溶性颗粒
电极不平衡或者加样位置偏了
加样量过多

可能的原因这么多啊!
凝胶为什么会冷却不均匀呢?这么小一块板,处于同样的环境,胶又是混匀后加进去的,也就在十几秒的时间就加好了,会是什么原因导致冷却不均匀呢?

玻璃板和凝胶底部的小气泡我从来没注意过,这个极有可能,下次注意一下!

样品溶解都是沸水浴煮过的,跑出来的条带不像有不溶性颗粒,所以这点应该没有问题。

关于电极,这个我就摸不着头脑了,加样应该也是没有什么问题,符合常规允许范围。

非常感谢您耐心的答复
7楼2013-07-01 10:18:25
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hia_25

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
4楼: Originally posted by Roger01 at 2013-06-26 23:44:56
帮顶


谢谢
8楼2013-07-01 10:18:53
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hia_25

铁虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-26 22:54:37
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3978670&fpage=1
还可以参考这个帖子

谢谢了!
9楼2013-07-01 10:19:53
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hia_25

铁虫 (小有名气)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-26 22:51:35
可能的原因
凝胶不均匀冷却,中间冷却不好
可能装置不合适, 凝胶和玻璃挡板底有bubble,或者俩遍聚合不完全
样品溶解不好
样品中含有不溶性颗粒
电极不平衡或者加样位置偏了
加样量过多

问题解决了,就是底部气泡的原因,我这两次都把气泡赶了赶,就没有出现裙边胶了,太感谢了
10楼2013-07-05 09:12:08
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