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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » SDS-PAGE电泳
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hia_25

铁虫 (小有名气)

[求助] SDS-PAGE电泳

大家好，请教一个问题：最近做SDS-PAGE电泳，发现每次跑完胶，撬开薄板以后，胶的下端总是裙边状，就是比上端要宽很多，做western杂的小分子带总是弯的，不知道怎么回事，很苦恼。分离胶的浓度是10%，80V或者90V恒压跑全程，溴酚蓝前沿出胶大约需要两个半小时。开始怀疑是跑时间长了，胶太热变形了，后来冰浴跑，还是一样。请各位资深高手指教啊！
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1楼2013-06-26 20:16:58
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hia_25

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by 青荷初想 at 2013-06-27 16:20:16
用薄板做western,图一般会不好看，我们实验室一般都是用1.5mm的，图还是不错的！

嗯，我们一直都用1.0的，总是有这样那样的问题，也不知道是不是这个胶板的问题。可以尝试一下，谢谢提醒
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6楼2013-07-01 10:07:55
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hia_25

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-26 22:51:35
可能的原因
凝胶不均匀冷却，中间冷却不好
可能装置不合适， 凝胶和玻璃挡板底有bubble，或者俩遍聚合不完全
样品溶解不好
样品中含有不溶性颗粒
电极不平衡或者加样位置偏了
加样量过多

可能的原因这么多啊！
凝胶为什么会冷却不均匀呢？这么小一块板，处于同样的环境，胶又是混匀后加进去的，也就在十几秒的时间就加好了，会是什么原因导致冷却不均匀呢？

玻璃板和凝胶底部的小气泡我从来没注意过，这个极有可能，下次注意一下！

样品溶解都是沸水浴煮过的，跑出来的条带不像有不溶性颗粒，所以这点应该没有问题。

关于电极，这个我就摸不着头脑了，加样应该也是没有什么问题，符合常规允许范围。

非常感谢您耐心的答复
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7楼2013-07-01 10:18:25
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hia_25

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by Roger01 at 2013-06-26 23:44:56
帮顶


谢谢
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8楼2013-07-01 10:18:53
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hia_25

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-26 22:54:37
http://muchong.com/bbs/viewthread.php?tid=3978670&fpage=1
还可以参考这个帖子

谢谢了！
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9楼2013-07-01 10:19:53
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hia_25

铁虫 (小有名气)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by myprayer at 2013-06-26 22:51:35
可能的原因
凝胶不均匀冷却，中间冷却不好
可能装置不合适， 凝胶和玻璃挡板底有bubble，或者俩遍聚合不完全
样品溶解不好
样品中含有不溶性颗粒
电极不平衡或者加样位置偏了
加样量过多

问题解决了，就是底部气泡的原因，我这两次都把气泡赶了赶，就没有出现裙边胶了，太感谢了
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10楼2013-07-05 09:12:08
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hia_25

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
11楼: Originally posted by leechau2007 at 2013-07-09 11:28:00
跑弯了有可能是电压加的有点大

我都是80V跑全程，电压应该不算大。
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13楼2013-07-09 19:47:10
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hia_25

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
12楼: Originally posted by 416114799 at 2013-07-09 12:56:00
① 凝胶时间太长，胶下沉；② 电压太高，TEMED太多，导致烧胶，胶下沉。

跑之前胶都是好的，胶的配方也是宝生物上面的配方，没有问题。现在问题已经知道原因了，谢谢
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14楼2013-07-09 19:49:17
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hia_25

铁虫 (小有名气)
引用回帖:
15楼: Originally posted by 416114799 at 2013-07-09 20:02:30
那你知道了就共享下。说不定我下次就不要问了。嘿嘿。...

呵呵，就是胶底部的气泡么有排除，排出了就好了！
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16楼2013-07-12 11:10:57
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