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疯一样的自由

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】蛋白纯化的问题

看到有文章说蛋白纯化步骤
将重组菌进行超声裂解之后,将存在可溶的目的蛋白的裂解液通过【纤维素膜】过滤后,再过层析柱。

【请问】通过纤维素膜过滤是过滤什么?蛋白不都吸附在纤维素膜了吗?

谢谢!
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不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励新虫发帖交流,欢迎常来! 2013-06-18 20:57:26
疯一样的自由: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-20 15:26:19
纤维素膜过滤是过滤掉不溶物质!如菌的细胞壁和细胞膜等物质!纤维素膜孔径大小不一致的,不知你的膜孔径多大,一般有0,22um和0.45um两种!可溶性蛋白是不会吸附在其上的!

也可以通过离心的方法除去沉淀,然后再过层析柱!
希望对你有用!
长得比我英俊的,没我有才华!有才华的,没我长得俊!
2楼2013-06-18 20:10:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
疯一样的自由: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-20 15:26:29
上柱子的样品最好先过滤,一般是用0.45μm的膜。否则大颗粒物容易堵塞柱子,对柱子的损伤大。
3楼2013-06-19 04:04:41
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greety0918

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
一般是0.22微米的膜,主要是起到除菌以及细胞碎片等不溶物的作用
终于硕士毕业了,解放ing
5楼2013-06-19 15:21:32
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
纤维素滤膜和一般除杂滤器不会吸附你的蛋白的,很多低蛋白吸附的滤膜都是纤维素的。离心的设备成本比较大,所以会推荐做过滤,现在你可以采用1μm的澄清过滤器来一步达到上柱所需的样品颗粒数。
6楼2013-06-19 15:30:05
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liu_chen_na

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
吸附蛋白的是NC膜,做Western时候的硝酸纤维素膜。
7楼2013-06-19 19:38:31
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普通回帖

疯一样的自由

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-06-18 20:10:17
纤维素膜过滤是过滤掉不溶物质!如菌的细胞壁和细胞膜等物质!纤维素膜孔径大小不一致的,不知你的膜孔径多大,一般有0,22um和0.45um两种!可溶性蛋白是不会吸附在其上的!

也可以通过离心的方法除去沉淀,然后再 ...

明白了,十分感谢!
4楼2013-06-19 09:40:43
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疯一样的自由

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
7楼: Originally posted by liu_chen_na at 2013-06-19 19:38:31
吸附蛋白的是NC膜,做Western时候的硝酸纤维素膜。

这俩不是一个货么
8楼2013-06-20 15:24:05
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liu_chen_na

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 疯一样的自由 at 2013-06-20 15:24:05
这俩不是一个货么...

对,后面一句话是对前面一句话的解释
9楼2013-06-20 15:56:56
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疯一样的自由

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
9楼: Originally posted by liu_chen_na at 2013-06-20 15:56:56
对,后面一句话是对前面一句话的解释...

哦。。。看岔了。。。哈哈
10楼2013-06-20 16:12:57
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