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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 【求助】蛋白纯化的问题
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疯一样的自由

新虫 (初入文坛)

[求助] 【求助】蛋白纯化的问题

看到有文章说蛋白纯化步骤
将重组菌进行超声裂解之后，将存在可溶的目的蛋白的裂解液通过【纤维素膜】过滤后，再过层析柱。

【请问】通过纤维素膜过滤是过滤什么？蛋白不都吸附在纤维素膜了吗？

谢谢！
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1楼 2013-06-18 18:31:29
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

不转录的DNA

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
amisking: 金币+4, 鼓励新虫发帖交流，欢迎常来！ 2013-06-18 20:57:26
疯一样的自由: 金币+5, ★★★很有帮助 2013-06-20 15:26:19
纤维素膜过滤是过滤掉不溶物质！如菌的细胞壁和细胞膜等物质！纤维素膜孔径大小不一致的，不知你的膜孔径多大，一般有0,22um和0.45um两种！可溶性蛋白是不会吸附在其上的！

也可以通过离心的方法除去沉淀，然后再过层析柱！
希望对你有用！
赞一下(3人) 回复此楼
长得比我英俊的，没我有才华！有才华的，没我长得俊！
2楼2013-06-18 20:10:17
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
疯一样的自由: 金币+1, ★★★很有帮助 2013-06-20 15:26:29
上柱子的样品最好先过滤，一般是用0.45μm的膜。否则大颗粒物容易堵塞柱子，对柱子的损伤大。
赞一下(2人) 回复此楼
3楼2013-06-19 04:04:41
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greety0918

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般是0.22微米的膜,主要是起到除菌以及细胞碎片等不溶物的作用
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终于硕士毕业了,解放ing
5楼2013-06-19 15:21:32
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wolfman840

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
纤维素滤膜和一般除杂滤器不会吸附你的蛋白的，很多低蛋白吸附的滤膜都是纤维素的。离心的设备成本比较大，所以会推荐做过滤，现在你可以采用1μm的澄清过滤器来一步达到上柱所需的样品颗粒数。
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6楼2013-06-19 15:30:05
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liu_chen_na

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
吸附蛋白的是NC膜，做Western时候的硝酸纤维素膜。
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2013-06-19 19:38:31
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普通回帖

疯一样的自由

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 不转录的DNA at 2013-06-18 20:10:17
纤维素膜过滤是过滤掉不溶物质！如菌的细胞壁和细胞膜等物质！纤维素膜孔径大小不一致的，不知你的膜孔径多大，一般有0,22um和0.45um两种！可溶性蛋白是不会吸附在其上的！

也可以通过离心的方法除去沉淀，然后再 ...

明白了，十分感谢！
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4楼2013-06-19 09:40:43
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疯一样的自由

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by liu_chen_na at 2013-06-19 19:38:31
吸附蛋白的是NC膜，做Western时候的硝酸纤维素膜。

这俩不是一个货么
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8楼2013-06-20 15:24:05
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liu_chen_na

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 疯一样的自由 at 2013-06-20 15:24:05
这俩不是一个货么...

对，后面一句话是对前面一句话的解释
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9楼2013-06-20 15:56:56
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疯一样的自由

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
9楼: Originally posted by liu_chen_na at 2013-06-20 15:56:56
对，后面一句话是对前面一句话的解释...

哦。。。看岔了。。。哈哈
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10楼2013-06-20 16:12:57
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