应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 表达载体构建
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
111/2返回列表12下一页
查看: 1464  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

Pushing2012

金虫 (正式写手)

[求助] 表达载体构建

本人打算用双酶切构建pet28a表达载体，用BamH1和Not1做双酶切，两个酶切效率不一样，想请教各位大虾，酶切时间一般用多久，BamH180度不易灭活，那么酶切完后不进行灭活对后面的连接有影响没
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2013-06-03 20:35:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bullfrog325

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Pushing2012(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-04 18:12:07
我切质粒用的时间一般是3个小时
不灭活不会影响连接的, 酶切反应过后有纯化这个步骤.
赞一下 回复此楼
2楼2013-06-04 02:10:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

窝窝头

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
切2-3个小时不行，就切过夜。
赞一下 回复此楼
3楼2013-06-04 07:44:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stevenshi021

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Pushing2012(myprayer代发): 金币+1, Send person rose fragrance in hand, thank you loosen one\'s purse strings generously, look forward to your wonderful 2013-06-04 18:12:19
BamHI最好过柱子去蛋白，这个酶死不掉。至于酶切时间我一般不超过1h,如果1h切不开那么就是1天也切不开的。
赞一下 回复此楼
4楼2013-06-04 10:02:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
酶切时间3-5小时足够了，切完之后对DNA片段进行一下纯化就好了
赞一下 回复此楼
5楼2013-06-04 13:12:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wangpeng227

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
Pushing2012(myprayer代发): 金币+1, 赠人玫瑰手有余香，感谢你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-04 18:12:35
酶切后，跑个琼脂糖凝胶电泳，回收一下，损失肯定有的，但是核酸的质量比较高，有利于连接的。
不要贪多，正确的克隆有三五个就够了。
赞一下 回复此楼
6楼2013-06-04 13:30:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huoyongting

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
用的酶不好吧，用NEB的内切酶，1h搞定
赞一下 回复此楼
7楼2013-06-04 15:30:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

84146922

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
看用的酶的公司
TAKARA的一般2-3小时，快速酶半小时内
NEB的1小时左右。
不用灭活，PCR纯化即可
赞一下 回复此楼
8楼2013-06-04 21:25:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

王者归来001

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
一般37 切2h，切完后需要回收再用连接酶连接。
赞一下 回复此楼
坚持不懈,终会成功!
9楼2013-06-04 22:53:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

taojun

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
我一般是37度，5小时就可以了啊！
赞一下 回复此楼
10楼2013-06-05 01:33:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Pushing2012 的主题更新
111/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 一志愿上海海洋大学083200食品学硕，求调剂，接受其他专业 +6 what张 2026-04-01 7/350 2026-04-02 16:48 by zzsw+
[考研] 26考研调剂 +4 Wnz.20030617 2026-04-01 5/250 2026-04-02 16:11 by 1939136013狗壮
[考研] 271求调剂 +15 勒布朗@ 2026-03-31 20/1000 2026-04-02 11:24 by Sammy2
[考研] 337求调剂 +11 《树》 2026-03-29 11/550 2026-04-02 10:20 by 不吃魚的貓
[考研] 材料求调剂 +10 呢呢妮妮 2026-04-01 13/650 2026-04-02 09:17 by olim
[考研] 一志愿南昌大学324求调剂 +12 hanamiko 2026-03-27 12/600 2026-04-01 22:34 by 运气yunqi
[考研] 303分 0807学硕求调剂 +3 TYC3632 2026-04-01 3/150 2026-04-01 19:24 by lwk2004
[考研] 化学0703 调剂 306分 一志愿211 +12 26要上岸 2026-03-28 12/600 2026-04-01 11:10 by chemdavid
[考研] 生物学296求调剂 +10 汤圆包 2026-03-29 14/700 2026-04-01 10:44 by 求调剂zz
[考研] 调剂申请 +8 张张张张zy 2026-03-31 9/450 2026-04-01 08:29 by zjbkx
[考研] 335求调剂 +3 321* 2026-03-31 4/200 2026-04-01 00:00 by 321*
[考研] 329求调剂，一志愿西北工业大学，材料工程（085601） +6 小小机灵虫 2026-03-29 12/600 2026-03-31 16:58 by 记事本2026
[考研] 本科211生物医学工程085409求调剂339分 +7 里子木yy 2026-03-29 7/350 2026-03-31 14:35 by fmesaito
[考研] 081200-11408-276学硕求调剂 +4 崔wj 2026-03-31 4/200 2026-03-31 11:56 by jp9609
[考研] 286求调剂 +5 丢掉懒惰 2026-03-27 8/400 2026-03-31 11:27 by Delta2012
[考博] 材料专业申博 +5 杜雨婷dyt 2026-03-29 5/250 2026-03-31 11:19 by oooqiao
[考研] 370求调剂 +3 080700调剂 2026-03-30 3/150 2026-03-31 01:09 by A_Zhe
[有机交流] 甲基亚磺磺酸钠和甲基磺酸酯反应机理 10+3 kaobao456 2026-03-29 4/200 2026-03-30 23:16 by nBu锂
[考研] 291求调剂 +5 Y-cap 2026-03-29 6/300 2026-03-29 13:18 by mumin1990
[考研] 求调剂 +7 争取九点睡 2026-03-28 8/400 2026-03-28 21:07 by 争取九点睡
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭