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新虫 (初入文坛)

[交流] 9KD的小分子,一定要用tricine胶跑吗?用一般的SDS-PAGE能不能跑得出来? 已有2人参与

做9KD的小分子,根据网上说的,用了 tricine胶,新鲜事物,好多条件都得重新摸索,结果也不好,而且太麻烦,想放弃,请问诸位大神,就用15%或者20%的SDS-PAGE(加或者不加甘油或尿素)能不能跑好这么小的分子,如果有做过10KD左右的,请教详细实验步骤,从电泳到转膜条件。总是怕转过了,其实每次染胶都发现胶上有残留,但是立春红染色,膜上从17KD以下,却是啥也没有,做小分子,这立春红还需不需要用呢?跪谢了。
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yxncas-2012

木虫 (正式写手)

★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+2, 鼓励发帖应助! 2013-06-03 20:40:13
理论上15%也可以的!跑的时间短一些!然后配胶的时候,加尿素!然后可以用考马斯亮蓝染色,看能不能在胶上明显的看到!如果能够,在用同样的条件去跑胶,做转膜!
2楼2013-06-03 20:12:04
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cicelyzh

铁杆木虫 (职业作家)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
普通SDS-PAGE在小分子量范围的分辨率不高,如果你只是要做western,抗体的特异性不错,不用tricine胶也是可以的。
李春红的灵敏度不高,如果你的样品中小分子量范围的蛋白丰度不高,染不出来也算正常。如果胶里有残留说明还没有转完全。你最好用0.22的膜。
3楼2013-06-04 01:41:19
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